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一种制备重组腺病毒的方法，包括：通过不依赖序列和连接反应的克隆法(SLIC)合并可杂交载体骨架与一个或多个可杂交腺病毒基因模块来组装腺病毒核心模块目标载体，其中所述的可杂交载体骨架包含p15A复制原点和I‑SceI哺乳动物表达盒，其中所述的一个或多个可杂交腺病毒基因模块形成核心模块，所述核心模块包含E2‑L2模块、L3‑L4模块、E2‑L2模块和L3‑L4模块两者、或E2‑L4模块，其中所述的核心模块至少长12kb；将核心模块侧翼的重组位点核酸序列插入到腺病毒核心模块目标载体中，从而形成可重组的核心模块目标载体；并通过位点特异性重组合并可重组的核心模块目标载体与一个或多个可重组的腺病毒基因模块以组装腺病毒基因组，其中所述的一个或多个可重组的腺病毒基因模块包含E1模块，E3模块，E4模块，或其任意组合；其中所述的可杂交载体骨架和一个或多个可杂交腺病毒基因模块包含长20至25碱基对的单链核酸突出；其中所述的可杂交载体骨架和一个或多个可杂交腺病毒基因模块在各个末端包含单链核酸突出；其中所述可杂交载体骨架的形成是通过：将环形载体骨架与内切核酸酶接触以形成线性载体骨架；和将线性的载体骨架与外切核酸酶接触以形成可杂交载体骨架；其中所述的重组位点核酸序列为attB，attP，attR或attL位点；其中所述的通过位点特异性重组法合并可重组核心模块目标载体与一个或多个可重组腺病毒基因模块包含将可重组的核心模块目标载体和一个或多个可重组的腺病毒基因模块与整合酶接触。 |
