一种检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法

摘要

本发明提供了一种检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器，包括金电极及金电极外依次修饰的capture probe层和RCA产物层；本发明提供的制备方法是采用核算适配体的特异性识别进行制备，其制备的电极灵敏度和特异性高，可快速的检测鼠伤寒沙门氏菌。

主权项

一种检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器， 其特征在于，在金电极从里到外依次修饰有捕获探针capture probe层、滚环复制RCA产物层；所述的生物传感器的制备方法，包括以下步骤：（1）对电极进行预处理；电极在0.3和0.05 μm的氧化铝浆中进行抛光处理，直到呈镜面，用PBS和二次水冲洗；（2）将捕获探针capture probe层修饰到电极表面；将10 μM的capture probe 10 μL滴加到经过预处理的电极表面，在25℃下孵育2 h；（3）将孵育好的RCA产物溶液滴加到修饰好捕获探针capture probe层的电极上，37℃，孵育2 h；具体步骤如下：1) 将灭菌水，10×的buffer缓冲液、1μL浓度为10μM的HAP和1μL待测目标物加入1号离心管中，震荡30 s，放入37℃的恒温箱中孵育2h；2) 向2号离心管中加入1μL浓度为10μM的挂锁探针padlock probe、1μL连接酶、1μL浓度为10μM的连接探针ligation probe，震荡30 s，放入37℃的恒温箱中孵育2 h；3) 向1号离心管中加入第2步所得产物，再加入1μL聚合酶和1μL dNTP，震荡30 s，放入37℃的恒温箱中孵育2 h；4) 将孵育好的混合溶液滴加到修饰好捕获探针capture probe层的电极上，将电极继续放在37℃的恒温箱中孵育2 h，清洗；5) 将电极插入到MB溶液中，37℃孵育10 min，清洗即得；所述的HAP、padlock probe、ligation probe、聚合酶、连接酶和dNTP的摩尔与活性的比为1：1：1：2：40：2；其中HAP、padlock probe和ligation probe的单位为摩尔，聚合酶、连接酶和dNTP的单位为活力；所述HAP的序列如SEQ ID NO ：1所示；所述padlock probe的序列如SEQ ID NO ：2所示；所述ligation probe的序列如SEQ ID NO ：3所示；所述capture probe的序列如SEQ ID NO ：4所示。