一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法

摘要

本发明是一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法，试纸条包括样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、双面胶和底板，样品垫及胶体金结合垫均进行了封闭处理和免疫反应加强处理，缩短了胶体金标记物的层析时间以及检测反应所需时间，有效避免因胶体金标记垫中残留的金颗粒的影响而导致加强之后产生的假阳、背景差等现象，明显提高胶体金免疫层析检测微量白蛋白的灵敏度和检测线性范围，具有准确、快速、能够定量检测的特点。

主权项

一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述试纸条包括样品垫(1)、金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)、双面胶(5)和底板(6)，所述微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备方法包括以下步骤：①制备胶体金溶液将氯金酸溶液加热至沸腾后，迅速加入质量百分含量为1％的柠檬酸三钠溶液，氯金酸溶液与柠檬酸三钠溶液的体积比为100：1.4，待颜色稳定后继续煮沸10min，制备出胶体金溶液，然后冷却，并在4℃保存备用；②制备胶体金标记抗体采用梯度试验法分别确定胶体金最小蛋白标记量和胶体金最佳标记PH，然后调节胶体金溶液至最佳pH，按最适标记蛋白量缓慢向胶体金溶液中添加标记抗体，通过磁力搅拌器混合均匀后，加入BSA即牛血清白蛋白溶液，使BSA终浓度为0.5％～2％，储存于4℃备用；对上步得到的胶体金标记抗体进行离心纯化，先低速离心20～40min，去除聚合凝集杂质，再高速离心20～40min，加入含有1％BSA的PB溶液，高速离心重复2～3次，最终用含有1％BSA的PB溶液将胶体金标记抗体复溶至原体积的1/10，即得胶体金标记抗体；③金标结合垫(2)预处理将玻璃纤维膜或聚酯纤维膜放入pH 7.2的0.01M PBS缓冲液中浸泡30min，所述缓冲液含有2％BSA、2％海藻糖和0.1％TritonX‑100，然后37℃烘干备用；④样品垫(1)预处理将玻璃纤维膜或聚酯纤维膜放入pH 7.2的0.01M PBS缓冲液中浸泡30min，所述缓冲液含1％BSA和0.1％TritonX‑100，然后37℃烘干备用；⑤试纸条制备用喷膜仪于硝酸纤维素膜(3)上喷捕获线(T/C)试剂，所述捕获线(T/C)试剂分别为人白蛋白和羊抗鼠二抗，喷金系数为1.2μL/cm；用喷金仪将胶体金标记抗体溶液喷于预处理后的金标结合垫(2)的玻璃纤维膜或聚酯纤维膜上，得到金标结合垫(2)，按2.5μL/cm喷入，并进行干燥；底板(6)采用PVC板，将样品垫(1)、金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)顺次搭接粘贴在PVC底板(6)上，按照设定的规格切条，制成微量白蛋白快速定量检测试纸条。