一种SNP分子标记及HRM法进行猪肉DNA溯源法

摘要

本发明属于食品技术领域，提供猪肉DNA溯源的SNPs分子标记，同时提供利用HRM法进行猪肉DNA溯源的方法。本发明提供了10个SNP分子标记，彼此间相互独立，基因杂合度均至少是0.4，适合作为猪肉溯源的SNPs分子标记。本发明通过HRM法即高分辨率熔解曲线分析方法获得10个SNP分子标记，再由所获得的有效SNPs位点组成一个猪肉的SNPs信息组，进而进行猪肉DNA溯源。本发明基于SNPs分子标记采用的HRM法进行猪肉DNA溯源具有简单、快捷、低成本的特点，10个SNPs分子标记稳定广泛的存在于猪基因组DNA中，有助于DNA溯源技术的大规模推广。

主权项

一种利用HRM法进行猪肉DNA溯源的方法，特征在于：包括如下步骤：1)从已发表文献或NCBI中选取SNPs位点，其中，SNPs位点应满足以下要求：A.任意相邻的SNP间的距离≥1Mb，保证SNPs间相互独立，不存在连锁现象；B.任意SNP位点与其他SNP位点不存在任何关联；C.SNP侧翼序列不存在任何变异；选择的SNPs位点分别为：SNP1：序列如SEQ ID NO.1所示，等位基因突变位点为：A/G；SNP2：序列如SEQ ID NO.2所示，等位基因突变位点为：C/T；SNP3：序列如SEQ ID NO.3所示，等位基因突变位点为：C/G；SNP4：序列如SEQ ID NO.4所示，等位基因突变位点为：A/GSNP5：序列如SEQ ID NO.5所示，等位基因突变位点为：C/TSNP6：序列如SEQ ID NO.6所示，等位基因突变位点为：A/GSNP7：序列如SEQ ID NO.7所示，等位基因突变位点为：A/GSNP8：序列如SEQ ID NO.8所示，等位基因突变位点为：A/GSNP9：序列如SEQ ID NO.9所示，等位基因突变位点为：A/GSNP10：序列如SEQ ID NO.10所示，等位基因突变位点为：A/G；2)取猪肉、猪血或猪毛发样品299个，提取其DNA；3)根据选取的SNPs位点，设计引物，利用HRM法对每个样品进行SNPs位点基因型分析；计算出每个单核苷酸多态性SNP的等位基因频率及杂合度；4)记录每一样品的SNPs位点信息；5)后期，选择的步骤2)中的猪有问题，将有问题的猪肉按照步骤2)到4)的方法，对作为DNA溯源的SNPs位点进行检测；6)将步骤5)得到的SNPs位点信息与步骤4)中记录的信息进行对比；7)根据溯源标记的SNPs的特征信息追溯猪肉来源。