一种基于TiO₂介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明公开一种基于TiO₂介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器的制备方法及应用，特点是基于两种TiO₂介晶纳米材料，结合电化学及电化学发光方法，制备一种新的双响应夹心型免疫传感器，并用于白介素6的检测。锐钛矿型TiO₂介笼材料和离子液体，分别用于固定Ru(bpy)₃²⁺和IL‑6抗体，作为信号探针和分子识别探针；八面体锐钛矿型TiO₂介晶材料用于固定辣根过氧化物酶标记的IL‑6二抗和酸性磷酸酶，其将通过典型的夹心型免疫反应自组装到电极表面，制得IL‑6夹心型免疫传感器。所制备的传感器可产生电化学信号及电化学发光信号，信号值与IL‑6浓度分别在10^‑6‑90 pg/mL范围内及10^‑8‑90 pg/mL范围内成线性。

主权项

一种基于TiO₂介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：玻碳电极（GCE）：首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；滴加4μL锐钛矿型TiO₂ 介笼（AMCs）/Ru(bpy)₃²⁺溶液于干净的玻碳电极表面，60°C下干燥20min，制得AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE修饰电极；滴加4μL 羧基化离子液体（CTIL）溶液于AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE修饰电极表面，60°C下干燥20min，制得CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE修饰电极；将CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE修饰电极浸入浓度比为1:2的（1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐）（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液中50min，再浸入5 μL浓度为2 mg/mL白介素6抗体（Ab₁)溶液中并在4°C冰箱中孵育45min，用去离子水洗去物理吸附的Ab₁，制得Ab₁/CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE修饰电极；将Ab₁/CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE修饰电极浸入0.5 wt.%的BSA溶液中并在4°C冰箱中孵育1 h，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中；将步骤（5）获得的电极浸入不同浓度的白介素6（IL‑6）标准溶液中并在4°C冰箱中孵育30 min，用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得IL‑6/Ab₁/CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/ GCE修饰电极；将IL‑6/Ab₁/CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/ GCE修饰电极浸入辣根过氧化物酶（HRP）标记的IL‑6二抗（Ab₂）和酸性磷酸酶（ACP）及八面体锐钛矿型TiO₂介晶（OAMs）（Ab₂‑HRP/ACP/OAMs）复合物溶液并在4°C冰箱中孵育40 min，用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得Ab₂‑HRP/ACP/OAMs/IL‑6/Ab₁/CTIL/AMCs/Ru(bpy)₃²⁺/GCE，并保存在4°C冰箱中。