EGFR基因突变检测引物探针及其试剂盒

摘要

本发明涉及一种EGFR基因突变检测引物探针及其试剂盒，试剂盒包括用于配制数字PCR反应液的数字PCR预混液、液滴稳定剂和引物探针混合液；引物探针混合液中包括用于检测19外显子E19‑Dels位点的上游引物a、下游引物a、缺失探针a和检测探针a，用于检测20外显子T790M位点的突变上游引物b、突变探针b、野生上游引物b、野生探针b、通用下游引物b，以及用于检测21外显子L858R位点的突变上游引物c、突变探针c、野生上游引物c、野生探针c、通用下游引物c。本发明的EGFR基因突变检测试剂盒可以快速、便捷、准确地检测非小细胞肺癌患者EGFR基因突变情况。

主权项

一种EGFR基因突变检测引物探针，其特征在于：包括用于检测19外显子E19‑Dels位点的上游引物a、下游引物a、缺失探针a和检测探针a，用于检测20外显子T790M位点的突变上游引物b、突变探针b、野生上游引物b、野生探针b、通用下游引物b，以及用于检测21外显子L858R位点的突变上游引物c、突变探针c、野生上游引物c、野生探针c、通用下游引物c；所述上游引物a的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物a的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述缺失探针a的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述检测探针a的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述突变上游引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述突变探针b的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，所述野生上游引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述野生探针b的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，所述通用下游引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；所述突变上游引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，所述突变探针c的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述野生上游引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示，所述野生探针c的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，所述通用下游引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；所述缺失探针a、突变探针b和突变探针c的5’端设有一种报告荧光基团，所述检测探针a、野生探针b和野生探针c的5’端设有另一种报告荧光基团，所述缺失探针a、检测探针a、突变探针b、野生探针b、突变探针c和野生探针c的3’端设有淬灭荧光基团；所述各上游引物在反应体系中的终浓度为0.1μM/L～1.5μM/L，所述通用下游引物在反应体系中的终浓度为1μM/L～3μM/L；所述缺失探针a、突变探针b和突变探针c在反应体系中的终浓度为0.1μM/L～0.19μM/L，所述检测探针a、野生探针b和野生探针c在反应体系中的终浓度为0.2μM/L～0.5μM/L。