一种基于RNAi后雄性不育对褐飞虱种群控制效果的饲养和评价方法

摘要

本发明涉及一种基于RNAi后雄性不育对褐飞虱种群控制效果的饲养和评价方法，采用RNAi饲喂法沉默褐飞虱雄虫精巢发育基因PHF7，通过检测其死亡率和基因沉默率，确定了dsNlPHF7的浓度；检测沉默后雄虫生长和生殖参数指标，主要包括体重、寿命、附腺蛋白含量和精氨酸含量等；检测经交配后雌虫的生长和生殖参数指标，主要包括体重、寿命、卵黄蛋白原含量、产卵量、YLS丰富度等；检测经交配后雌虫脂肪体内卵黄原蛋白基因的表达水平。通过检测褐飞虱雄虫或雌虫的重要的生殖参数指标定量评价褐飞虱种群增长控制效果，该方法操作简便快捷，具有广泛的适用性。本发明为褐飞虱的防治提供了新的防治途径，具有重要的理论意义和实用价值。

主权项

一种基于RNAi后雄性不育对褐飞虱种群控制效果的饲养和评价方法，其特征在于：利用RNAi技术控制雄虫不育，然后再利用不育的雄虫与雌虫交配后检测其雄虫或雌虫的生殖参数来定量评估褐飞虱种群增长的控制效果,饲养方法包括如下步骤：(1)dsRNA引物设计：根据已知的NlPHF7基因(NLU00303)序列设计引物，采用引物设计软件设计特异性物；对每条引物进行评价和修改，以避免在引物内或引物间二聚体以及引物错配位点的出现等，最终设计出dsPHF7双链引物；(2)褐飞虱雄虫RNA的提取和cDNA合成：采用试剂盒提取褐飞虱雄虫总RNA，然后合成cDNA；(3)dsPHF7合成：采用试剂盒合成dsPHF7后，通过紫外吸收光谱法定量测定纯化的dsPHF7浓度，并用琼脂糖凝胶电泳检测以确保其完整性；(4)褐飞虱种群室内RNAi的饲养：褐飞虱3龄若虫用人工饲料进行饲养，用玻璃双通管作为饲养室，两侧开口用Parafilm膜封住，加40μL含有浓度为0.05μg/mL的dsPHF7的液态人工饲料，再用Parafilm膜将饲料封住。