R‑琥珀酸曲格列汀光学纯度的测定方法

摘要

本发明涉及一种二肽基肽酶‑Ⅳ（DPP‑Ⅳ）抑制剂，即R‑琥珀酸曲格列汀光学纯度的检测方法。本发明采用添加二乙胺的流动相的手性色谱法测定R‑琥珀酸曲格列汀汀光学纯度的方法。该方法是利用在流动相中添加二乙胺，调节流动相pH，稳定手性填料的空间构型，改变了手性填料对R‑琥珀酸曲格列汀与S‑琥珀酸曲格列汀的键合作用，从而提高了R‑琥珀酸曲格列汀与S‑琥珀酸曲格列汀之间的分离效能，实现了用手性色谱法进行光学纯度的测定，首次创新性地解决了R‑琥珀酸曲格列汀光学纯度测定这一技术难题。

主权项

一种R‑琥珀酸曲格列汀光学纯度的测定方法，其特征在于，（1）色谱条件：色谱系统为高效液相色谱仪，色谱柱填料为直链淀粉‑三（3,5‑二甲苯基氨基甲酸酯），即AD‑H手性色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相A为正己烷，流动相B为二乙胺的乙醇溶液，且所述的正己烷与0.1%二乙胺的乙醇溶液的体积比为55:45~65:35，二乙胺的浓度为0.05%~0.15%，流动相在0.8~1.2mL·min‑1，检测波长：278nm；所述流动相中二乙胺的乙醇溶液中，二乙胺的浓度为0.1%；所述流动相中正己烷与0.1%二乙胺的乙醇溶液的体积比是60:40；（2）检测方法，含有以下步骤：取R‑琥珀酸曲格列汀对照品、S‑琥珀酸曲格列汀对照品各适量，分别置于25ml量瓶中，分别加无水乙醇溶解并定量稀释制成各约为0.5mg/ml的溶液，作为R‑琥珀酸曲格列汀对照品贮备液；1） R,S‑琥珀酸曲格列汀对照品溶液：精密量取上述贮备液各0.25ml，置同一100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得，作为系统适应性试验溶液；2）S‑琥珀酸曲格列汀对照品溶液：精密量取上述S‑琥珀酸曲格列汀对照品贮备液0.25ml，置于100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得，作为S‑琥珀酸曲格列汀对照品定位溶液；3）R‑琥珀酸曲格列汀对照品溶液：精密量取上述R‑琥珀酸曲格列汀对照品贮备液0.25ml，置于100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得，作为R‑琥珀酸曲格列汀对照品定位溶液；4）R‑琥珀酸曲格列汀供试品溶液：精密称取R‑琥珀酸曲格列汀供试品适量，加无水乙醇定量稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；5）精密量取供试品溶液0.5ml，置200ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；6）取对照溶液20µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%～20%，精密量取供试品溶液与对照溶液各20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，按峰面积归一化法计算光学纯度；7）色谱条件：以CHIRALPAK AD‑H手性柱为色谱柱；以正己烷‑无水乙醇（60：40）（含0.1%二乙胺）为流动相；检测波长为278nm；柱温为25℃；流速为每分钟1.0mL，进样量20µL；8） 首先分别对R,S‑琥珀酸曲格列汀对照品溶液与S‑琥珀酸曲格列汀对照品溶液进样，进行系统适应性分析，再对R‑琥珀酸曲格列汀供试品溶液进行光学纯度测定，按面积归一化法计算样品的光学纯度。