一种DNA捕获探针的制备方法及应用

摘要

本发明提供一种DNA捕获探针的制备方法及应用，采用了扩增目的基因‑随机打断‑生物素标记的探针制备方法，利用随机覆盖的设计思路取代了传统的瓦片式覆盖，与传统探针制备方法中合成大量DNA覆盖目标区域相比，本发明仅需合成目标区域的扩增引物，避免了直接合成探针造成的成本上升问题，因而大大降低了制备成本且捕获的灵敏性与特异性与传统探针制备方法制备的探针相比没有差异。

主权项

一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)针对基因组中感兴趣区域设计特异的扩增引物，利用扩增引物扩增所述感兴趣区域得扩增产物；(2)采用超声处理的方法将所述扩增产物打断为DNA片段将扩增产物稀释至10ng/μL，然后取100μL稀释后的扩增产物放入超声仪中进行超声处理，超声仪的输出功率为1000Hz，超声处理次数为90次，单次超声处理时间为15秒，两次超声处理间间隔15秒；(3)对DNA片段进行生物素标记DNA片段于95℃变性5min后，迅速插入冰上；完全冷却后，加入4μLBiotin‑high prime，充分混匀，37℃孵育过夜；(4)经过步骤(3)后，从所述DNA片段中分离得到标记有生物素的DNA单链，得DNA捕获探针；所述感兴趣区域为人线粒体DNA。