一种快速定量测定芽孢浓度的方法

摘要

本发明提供了一种快速定量测定芽孢浓度的方法，包括以下步骤：(1)待测样品的前处理：将待测芽孢样品离心后收集菌体，然后将菌体重悬到缓冲液中；(2)重悬液中DPA的释放：采用诱导芽孢萌发的方法促进重悬液中芽孢体内DPA的释放，所述诱导芽孢萌发的方法为物理方法或添加化学诱导剂，将诱导芽孢萌发后的重悬液进行离心，收集上清液；(3)DPA的荧光检测：将上清液稀释后与EuCl₃和CYDTA充分混合均匀，采用荧光分光光度计测定上述混合溶液的荧光强度；(4)标准曲线的制作与活菌总数的换算。本发明提供的方法相对传统平板计数法更加简洁，精准度高，重现性好。

主权项

一种快速定量测定芽孢浓度的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)待测样品的前处理：将待测芽孢样品用缓冲液进行稀释，混合均匀后将芽孢充分悬浮到缓冲液中，静置后从上层悬浮液中定体积量取芽孢悬浮液，并将悬浮液离心后收集菌体，然后将菌体重悬到缓冲液中；(2)重悬液中DPA的释放：采用诱导芽孢萌发的方法促进重悬液中芽孢体内DPA的释放，所述诱导芽孢萌发的方法为物理方法或添加化学诱导剂，将诱导芽孢萌发后的重悬液进行离心，收集上清液；(3)DPA的荧光检测：将上清液稀释后与EuCl₃和CYDTA充分混合均匀，空白对照为缓冲液与EuCl₃和CYDTA的混合液，采用荧光分光光度计测定上述混合溶液的荧光强度，测定过程中激发波长范围260～280nm，发射波长范围610～630nm；(4)标准曲线的制作与活菌总数的换算：将已知细胞浓度的芽孢悬浮液经过缓冲液稀释后，分别测定稀释已知细胞浓度对应的DPA荧光强度值，以芽孢的活菌浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线方程；然后根据待测样品的荧光强度测量结果，采用回归方程换算成对应的活芽孢浓度。