移植术后嵌合体的检测方法

摘要

本发明涉及一种移植术后嵌合体的检测方法，包括如下步骤：DNA的提取、采用PCR方法鉴定SRY基因和采用Q‑RT‑PCR方法鉴定SRY基因。根据本发明的移植术后嵌合体的检测方法，以性别决定基因SRY为监测对象，将普通PCR方法和Q‑RT‑PCR方法相结合，能够灵活、简便、快速的测定移植后受体外周血中是否存在嵌合体，并可以相对的对嵌合体进行定量的分析。

主权项

移植术后嵌合体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：DNA的提取：提取动物外周血中的DNA，并通过洗脱缓冲溶液TE将提取的所述DNA配制成浓度为10ng/μL和50ng/μL的DNA溶液，选择SRY基因作为目标检测物；采用PCR方法鉴定SRY基因：合成第一引物GTG GTC TCG CGA TCA GAGG和TGG CCT GTA GTT TCT GTGCC，将所述第一引物浓度调整到10pmol/ul，整个反应体系包括10μL预混液(Thermo USA)、1μL Primer STR‑S‑F、1μL Primer STR‑S‑F、5μL水以及3μL所述浓度为50ng/μL的DNA溶液，整个反应体系总体积为20ul；采用Q‑RT‑PCR方法鉴定SRY基因：合成第二引物GCGCAAGATGGATCTAGAGAA和TATCGGCTTCGGTAAGCATT，将受体DNA和供体DNA依次按照不同比例进行配比，在所述配比过程中，采用浓度为10ng/uL的DNA，其中，供体DNA的质量含量依次为90％、50％、40％、30％、20％、10％、5％和1％。该反应体系包括SYBR Green 5μL，1μL Primer‑F，1μL Primer‑R，2ul的H₂O以及1ul的DNA，该反应体系总体积为10ul，反应体系中第二引物的浓度为1.5pmol/μL。