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一种检测区域性猪流感病毒亚型分布的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、采集血清样品，按照不同地点将其分成不同组，对每组中的每份血清样品进行处理，处理步骤为：在每30μL血清样品中加入15μL 8mg/mL的胰酶溶液，56℃水浴处理30min，加入60μL 2.3mg/mL的高铁酸钠水溶液和60μL 体积百分数为3%的过氧化氢水溶液，混匀后室温静置15min，再加60μL质量体积百分数为0.5%的聚乙二醇水溶液，混匀后室温静置10min，与75μL的PBS溶液混合，得待检血清；取待检血清和体积分数为1%的鸡红细胞悬液，按照1:1的体积比将两者进行混合，鸡红细胞呈泪滴状下沉，血清样品处理成功，待检血清用于后续步骤；步骤二、在V型微量反应板的2‑12孔中分别加入50μL的PBS溶液；在第1孔中加入100μL待检抗原，将其吸出50μL置于第2孔中，混匀后从第2孔中吸出50μL置于第3孔中，依次进行系列倍比稀释至第11孔，弃最终的50μL；在第1至12孔中加入50μL的1%的鸡红细胞悬液，将V型微量反应板置于微量振荡器上处理1‑2min，37℃静置15min，观察结果，获取待检抗原的血凝单位；步骤三、根据步骤二的结果配制浓度为4个血凝单位的待检抗原，在V型微量反应板的2‑11孔中分别加入25μL的PBS溶液，第12孔加入50μL的PBS溶液；在第1孔加入50μL处理好的待检血清，将其吸出25μL置于第2孔中，混匀后从第2孔中吸出25μL置于第3孔中，依次进行系列倍比稀释至第10孔，弃最终的25μL；在第1‑11孔中分别加入25μL 浓度为4 个血凝单位的待检抗原，37℃静置30分钟，第1‑12孔中分别加入50μL的1%的鸡红细胞悬液；以完全抑制4个血凝单位待检抗原的待检血清最高稀释倍数作为血清抗体的效价，血清抗体效价≥40 时为阳性；步骤四、对步骤三获得的数据进行统计分析，比较不同组待检血清阳性率的差异是否显著。 |
