一种提取葡萄溃疡病菌菌丝RNA的方法

摘要

本发明公开了一种提取葡萄溃疡病菌菌丝RNA的方法。该方法包括：将液氮中保存的葡萄溃疡病菌菌丝，液氮中磨成粉末；将粉末转入预冷的离心管中，以每90‑110mg粉末加1mL的比例加入Trizol抽提液，摇动使其混匀，室温下放置；加入氯仿，剧烈震荡，室温放置，离心；取上清液于一新的离心管中，加入异丙醇和沉淀缓冲液，颠倒混匀；离心；弃去上清液，加1mL体积百分浓度为75％的乙醇溶液清洗RNA沉淀块，离心弃上清；重复清洗操作；弃乙醇，开盖室温放置10‑15min，或真空干燥，使乙醇完全挥发；获得的沉淀即RNA产物。本发明的方法提取的RNA具有纯度高、产量高的优点。

主权项

一种提取葡萄溃疡病菌菌丝RNA的方法，包括下述步骤：1)研钵和研棒预先用液氮冷却，取出液氮中保存的葡萄溃疡病菌菌丝，液氮中磨成粉末；2)将粉末转入预冷的离心管中，以每90‑110mg粉末加1mLTrizol抽提液的比例加入Trizol抽提液，摇动使其混匀，室温下放置10‑15min；3)加入是Trizol抽提液体积的1/5的氯仿，剧烈震荡，室温放置3‑5min，于4℃12000g，离心15‑20min；4)取上清液于离心管中，加入异丙醇沉淀缓冲液，颠倒混匀；室温放置10‑12min，于4℃13000g离心10‑15min；所述沉淀缓冲液为含1.2‑1.5mol/LNaCl和0.5‑0.8mol/L柠檬酸二钠盐·15H₂O的溶液；其中，上清液、异丙醇和沉淀缓冲液的体积比为4:(1‑3):(1‑3)；5)弃去上清液得到RNA沉淀块，加1mL体积百分浓度为70％‑75％的乙醇溶液清洗RNA沉淀块，于4℃12000g离心5‑10min；6)弃去上清液，重复步骤5)；7)弃乙醇，开盖室温放置2‑5min，或真空干燥，使乙醇完全挥发；获得的沉淀即RNA产物。