二价双特异性抗体杂交蛋白的表达和制备方法

摘要

本发明公开了一种生物技术领域的二价双特异性抗体杂交蛋白的表达和制备方法。本发明将二价双特异性抗体及其免疫杂合蛋白的各部分分别在合适的原核或真核细胞系统中表达，经高效的亲和层析纯化分离，然后在体外在intein剪接的条件下进行剪接，达到制备二价双特异性抗体及免疫杂合蛋白的产物的目的。本方法具有生产效率高，适和应用的面广，并有利于产物分离纯化。用此方法制备的产物具有二价双特异免疫亲和力和细胞毒性的生物活性，是制备定向攻击癌症或其他疾病的生物药物的一种新方法。

主权项

一种二价双特异性抗体的表达和制备方法，所述二价双特异性抗体包括特异性结合第一抗原的抗体的第一轻链、第一重链，特异性结合第二抗原的抗体的第二轻链、第二重链；其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、将所述二价双特异性抗体的表达序列进行拆分，获得A部分抗体和B部分抗体；所述A部分抗体包括第一轻链、第一重链和N端融合了IC的第二重链的Fc链；所述B部分抗体包括第二轻链和C端融合有IN的第二重链的VH+CH1链，；S2、经全基因合成构建哺乳动物细胞表达载体，分别获得A部分抗体的表达载体和B部分抗体的表达载体；S3、转染试剂介导A部分抗体的表达载体转染哺乳动物细胞，或者稳定表达A部分的稳转细胞株，表达获得A部分抗体；转染试剂介导B部分抗体的表达载体转染哺乳动物细胞，或稳定表达B部分的稳转细胞株，表达获得B部分抗体；S4、分别纯化所得的A部分抗体和B部分抗体，进行A部分抗体和B部分抗体的体外反式剪接，即得所述二价双特异性抗体。