一种用于检测基因突变的多定位双标签接头组及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种用于检测基因突变的多定位双标签接头组及其制备方法和应用，该多定位双标签接头组由双标签接头A、双标签接头B和双标签接头C组成，双标签接头A、双标签接头B和双标签接头C分别由接头引物P5分别与5’端均修饰有生物素的接头引物P7‑A、接头引物P7‑B和接头引物P7‑C合成而得到。利用本发明的多定位双标签接头组，可以准确检测1×10^‑5基因突变率，有效提高基因突变检测的灵敏度，结合高通量测序的通量，一次测序可以检测多个基因的多个突变位点。

主权项

一种用于检测基因突变的多定位双标签接头组，其特征在于：由双标签接头A、双标签接头B和双标签接头C组成，双标签接头A、双标签接头B和双标签接头C分别由接头引物P5分别与5’端均修饰有生物素的接头引物P7‑A、接头引物P7‑B和接头引物P7‑C合成而得到，其中：接头引物P5为SEQ ID NO：01通过I5 index序列连接SEQ ID NO：02所示序列所得，接头引物P7‑A为FFFFFEEEEEJJJJJNNNNNNNNNNNN依次连接在SEQ ID NO：03的5’端，SEQ ID NO：03再通过I7 index序列连接SEQ ID NO：04所示序列所得；接头引物P7‑B为FFFFFEEEEEKKKKKNNNNNNNNNNNN依次连接在SEQ ID NO：03的5’端，SEQ ID NO：03再通过I7 index序列连接SEQ ID NO：04所示序列所得；接头引物P7‑C为FFFFFEEEEELLLLLNNNNNNNNNNNN依次连接在SEQ ID NO：03的5’端，SEQ ID NO：03再通过I7 index序列连接SEQ ID NO：04所示序列所得；所述FFFFF为酶切位点保护碱基，EEEEE为酶切位点，JJJJJ、KKKKK和LLLLL为定位标签序列且JJJJJ、KKKKK和LLLLL各不相同，NNNNNNNNNNNN为随机分子标签序列；FFFFF、JJJJJ、KKKKK、LLLLL和EEEEE包括但不限于5个相同碱基，I7 index序列为6～8个碱基；NNNNNNNNNNNN为4到12个随机碱基，且没有四个连续相同的碱基。