一种Al‑¹⁸F标记融合肽及其应用

摘要

本发明公开了一种Al‑¹⁸F标记融合肽及其制备方法，其包括连接在一起的胶质瘤特异性靶向多肽cRGDyK和A7R。其制备方法包括如下步骤：（1）制备NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R；（2）制备¹⁸F生理盐水溶液；（3）制备[Al¹⁸F]NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R；（4）纯化所制得的[Al¹⁸F]NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R，即得所述Al‑¹⁸F标记融合肽。本发明的Al‑¹⁸F标记融合肽包括连接在一起的胶质瘤特异性靶向多肽cRGDyK和A7R，利用其不同的靶向生物学特性进一步提高了融合肽对胶质瘤的特异性。

主权项

一种Al‑¹⁸F标记融合肽的制备方法，其特征在于：该Al‑¹⁸F标记融合肽包括连接在一起的胶质瘤特异性靶向多肽cRGDyK和A7R，其结构式如下：其中，n＝1，该方法包括如下步骤：(1)制备NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R：将[2‑[2‑(芴甲氧羰基‑氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸溶于1mL DMF中，加入NHS和DCC，室温下搅拌反应2小时；将RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R加入上述反应液中，用DIEA将pH调节到8.0‑8.5，室温搅拌过夜；向反应液中加入3mL 0.5M pH＝7.0的NH₄OAc缓冲液并过滤，滤液经HPLC分离纯化，收集目标产物的馏分，合并后冻干，产物芴甲氧羰基‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R加入20％哌啶于常温下反应30min，脱去芴甲氧羰基，然后加入1，4‑二乙酸‑1,4,7‑三氮杂环壬烷‑7‑乙酸‑N‑羟基琥柏酰亚胺中反应24h，经HPLC分离纯化，收集目标馏分，合并后冻干，得目标产物NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R；(2)制备¹⁸F生理盐水溶液：在回旋加速器上用核反应¹⁸O(p,n)¹⁸F制得[¹⁸F]F^‑，然后富集在Sep‑Park light QMA柱上，用去离子水淋洗以除去吸附在QMA柱上的金属杂质离子，用0.2～1mL生理盐水洗脱得到¹⁸F生理盐水溶液；(3)制备[Al¹⁸F]NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R：向反应容器中加入3～10μL 2nmol/L的AlCl₃，10～30μL 0.1mol/L pH＝4.0的醋酸钠缓冲液，然后加入100～300μL 925～1850MBq的上述¹⁸F^‑生理盐水溶液混合3min，再加入300～600μL 1mg/mL的NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R的去离子水溶液，混合物摇匀后在80～110℃反应10～30min，冷却至常温，用HPLC测定其标记率；(4)纯化所制得的[Al¹⁸F]NOTA‑PEG‑RGDyK‑Lys‑Ac‑A7R，即得所述Al‑¹⁸F标记融合肽：将步骤(3)所得物料缓慢注入事先活化过的Sep‑Pak C18柱，再用10～20mL蒸馏水淋洗除去水溶性杂质，吹干后用200～600μL 75％的盐酸乙醇淋洗，淋洗液用生理盐水稀释至乙醇含量小于10％，用HPLC测定其保留时间和放化纯，观察其外观性状是否为无色澄清透明液体。