一种扎伊尔型埃博拉病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种扎伊尔型埃博拉病毒恒温扩增检测试剂盒，所述试剂盒包括RNA提取试剂、恒温扩增反应液、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒特异性高、灵敏度高；从病毒RNA逆转录到链置换扩增全部恒定同一温度，恒温扩增仅需35分钟，核酸试纸条检测结果需1‑2分钟，全程从接受样品到获得结果整个检测过程仅需1小时左右，且整个反应过程只需一个恒温仪器，特别适合现场快速检测使用。

主权项

一种扎伊尔型埃博拉病毒恒温扩增检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括下列组成：(1)RNA提取试剂；(2)恒温扩增反应液：包括正向外围引物，反向外围引物，两条探针，两条扩增交叉引物，1×Thermol Buffer，MgSO₄，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶，AMV逆转录酶和无菌双蒸水；所述正向外围引物为：5′‑TGGTTCAAGTGCACAGTCAA‑3′；反向外围引物为：5′‑TGTCTGCTCTACGGTGATGT‑3′；所述两条探针的序列分别为：正向5’端Biotin标记探针5′‑Biotin‑GCAAGGGTTGTCAGATGCG‑3′；反向3’端FitC标记探针5′‑Fitc‑ATAATACACCCGTGTATAAACTTGAC‑3′；所述两条扩增交叉引物分别为：扩增正向引物：5′‑AGGGATTGGGGACTCGTGGAGGGAAGGAAAGCTGCAGTGT‑3′；扩增反向引物：5′‑CCAAACCAGGTCCGGACAACAGTCCAACTTGAGTTGCCTCAG‑3′；(3)阳性对照：含有扎伊尔型埃博拉病毒的糖蛋白DNA质粒；(4)阴性对照：无菌双蒸水；所述1×Thermol Buffer含有摩尔浓度为20mM的Tris‑HCl、10mM的KCl、10mM的(NH₄)₂SO₄、2mM的MgSO₄以及质量浓度为0.1％的Triton X‑100，pH 8.8。