一种化学发光-胶体金免疫层析试纸条的构建及应用

摘要

本发明涉及一种化学发光‑胶体金免疫层析试纸条的构建方法及应用，特别涉及一种高灵敏、可定量的化学发光‑胶体金免疫层析试纸条的构建方法及应用。所述方法是将化学发光和胶体金免疫层析方法相结合，包括：将胶体金的表面同时偶联上检测抗体和酶，形成胶体金‑酶‑抗体复合物，再依次将胶体金‑酶‑抗体复合物、包被抗体分别喷在样品结合垫和膜上，通过免疫层析反应，基于胶体金的颜色深浅实现定性检测，基于酶催化的化学发光反应的光强度实现定量检测，从而构建得到化学发光‑胶体金免疫层析试纸条；将所述试纸条应用于生物大分子和小分子的检测。本发明可同时实现定性、定量和高灵敏的检测，适合现场检测和家庭个性化诊断。

主权项

一种用于非诊断目的的同时检测甲胎蛋白和胎癌蛋白的化学发光‑胶体金免疫层析试纸条的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：1)将检测抗体和辣根过氧化物酶分子按1:10的比例加到胶体金溶液中，使胶体金的表面同时偶联所述抗体和酶分子，形成胶体金‑酶‑抗体复合物溶液，其具体操作为：调节胶体金溶液的pH值为8.5，然后加入检测抗体和酶分子，在室温下振荡反应1‑2小时，然后加入浓度为3％的BSA溶液封闭多余的位点，反应0.5‑1小时并在10000‑12000r/min的转速下离心10‑20分钟后，去掉上清液，加入浓度为0.01M，pH值为7.4的含0.1％BSA的PBS溶液，重悬，再离心，该步骤重复2‑3次，得到表面既修饰有检测抗体，同时偶联有酶分子的胶体金‑酶‑抗体复合物溶液，在4℃冰箱保存；并将所述复合物溶液喷在结合物垫上；2)将包被抗体液喷到硝酸纤维素膜上形成检测线(1)，将羊抗小鼠二抗液喷到膜的另一区域形成控制线(2)；3)将样品垫、步骤1)所制得的结合物垫、步骤2)所制得的膜、吸水垫依次粘贴在塑料底衬上，组装成化学发光‑胶体金免疫层析试纸条；在所述试纸条中，检测线(1)上胶体金颜色的深浅作为定性的依据，同时胶体金表面偶联的酶分子数量作为化学发光定量的依据；所述化学发光‑胶体金免疫层析试纸条的使用方法，包括如下步骤：1)将待测样品加到所述试纸条上，免疫层析反应5‑10min；2)肉眼观察所述试纸条上检测线(1)上胶体金颜色的深浅，得到所述试纸条定性检测样品的结果；3)然后在原来的试纸条上添加化学发光底物，并用化学发光仪采集化学发光信号，化学发光强度和酶分子的量成正相关，而酶分子的量和待检抗原成正相关，因此，通过化学发光强度得到定量检测样品的结果。