一种虫草类药材样品中两种微量核苷的检测方法

摘要

本发明公开了一种在线固相萃取‑HPLC法测定虫草类样品中两种微量核苷3’‑脱氧腺苷(虫草素)和其同分异构体2’‑脱氧腺苷(异虫草素)的方法：采用固相萃取‑HPLC法进行检测，固相萃取柱为ZORBAXSB‑AQ(12.5mm×4.6mm，5μm)，分析柱为ZORBAX SB‑AQ(150mm×4.6mm，5μm)。色谱条件为去离子水‑甲醇(91:9)冲洗固相萃取柱3min，除去杂质；六通阀切换使固相萃取柱与分析柱连通，3‑5min时流动相逐渐转化为0.1％甲酸水溶液‑甲醇(91:9)，继续洗脱12min。进样体积为40μL，流速为1mL/min，柱温40℃，检测波长为260nm。本发明方法检测时间极大缩短，操作简单，专属性强，适用于虫草类样品中虫草素和异虫草素的同时快速分析，采用六通阀切换流路，避免杂质进入分析柱，保护分析柱。

主权项

一种在线固相萃取‑HPLC法分析虫草类样品中3’‑脱氧腺苷和2’‑脱氧腺苷的分析方法，包括以下测定步骤：a、供试品溶液的制备：准确称取样品粉末适量，置于离心管中，加入适量超纯水，混匀，超声提取，摇匀，离心，取上清液过膜，即得供试品溶液；b、混合对照品溶液的制备：精密称取3’‑脱氧腺苷和2’‑脱氧腺苷对照品适量，用100mL容量瓶定容，得浓度为201.4μg/mL的3’‑脱氧腺苷和198.5μg/mL的2’‑脱氧腺苷混合对照品溶液；c、在线固相萃取‑HPLC测定：检测装置包括固相萃取柱、分析柱、六通阀、废液收集器和检测器；其中固相萃取柱为ZORBAX SB‑AQ柱，柱长为12.5mm，内径为4.6mm，填料粒直径为5μm；分析柱为ZORBAX SB‑AQ柱，柱长为150mm，内径为4.6mm，填料粒直径为5μm；混合对照品溶液和供试品溶液检测器类型为紫外检测器；检测条件为：流速为1mL/min，柱温为40℃，进样量为40μL，检测波长：260nm；检测方法为：样品进样后经过固相萃取柱净化富集，首先采用9％甲醇水溶液冲洗3min，除去杂质，3min时由废液流路切换至分析流路，3‑5min时流动相逐渐转化为0.1％甲酸水‑甲醇溶液，其体积比为91:9，继续洗脱12min；d、混合对照品分别进样1μL、5μL、10μL、20μL、30μL和40μL，供试品进样40μL，分别测定峰面积，根据混合对照品峰面积与浓度制作对照品3’‑脱氧腺苷和2’‑脱氧腺苷的标准曲线，计算线性方程和相关系数；e、根据所得的供试品峰面积和步骤d线性方程计算供试品中3’‑脱氧腺苷和2’‑脱氧腺苷的含量。