竹柏种子组织培养无菌体系快速建立的方法

摘要

本发明涉及竹柏种子组织培养无菌体系快速建立的方法，其先将种子放到4^oC风冷冰箱中冷藏，待手拿种子有种仁晃动感觉时，取出种子依次用洗衣粉水溶液、无菌水充分洗净，在无菌操作台上依次用75%酒精、0.1%的Hgcl₂消毒和无菌水冲洗后，置于无菌滤纸吸干水分，再用钳子将种壳破裂或破碎，用镊子取出去壳种子，接种到1/2MS培养基中培养；培养基中添加有蔗糖、琼脂粉，或再加入6‑BA、NAA和KT，PH 5.5‑5.8；培养温度25±2℃，先暗培养7天，然后每天用1500－2700Lux白光光照12小时，共培养15－17天。

主权项

竹柏种子组织培养无菌体系快速建立的方法，其特征包括以下A、B、C、D四个步骤：A、 将种子放到4^oC风冷冰箱中冷藏，待手拿种子有种仁晃动感觉时，取出种子；B、 将经过A处理的种子放入1%洗衣粉水溶液中浸泡10分钟，用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；C、将经过B处理的种子放在超净工作台上，将种子放置在75%酒精中浸泡30s后，再用0.1%的Hgcl₂水溶液浸泡13min，然后用无菌水冲洗5次，置于无菌滤纸上吸干水分；D、将经过C处理过的种子用钳子将种壳破裂或破碎，用镊子取出去壳种子，接种到培养基中培养，该培养基为1/2MS培养基，再添加蔗糖18‑21g/L、琼脂粉5.3‑5.7g/L，6‑BA0.4‑0.6mg/L、NAA0.3‑0.4mg/L和KT0.4‑0.6mg/L，调节PH至5.5‑5.8；培养条件是在温度25±2℃下、先暗培养7天、然后每天用1500－2700Lux白光光照12小时，共培养15－17天。