从脐带组织中高效获取间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种从脐带组织中高效获取间充质干细胞的方法，为解决现有方法获取时间长效率低问题，其步骤包括脐带间充质干细胞的原代分离：将洗净剪碎的脐带组织块用胰蛋白酶预消化后弃去消化液，用DPBS反复冲洗后，再用胶原酶I消化液于37℃水浴摇床上消化，细胞筛网过滤后的滤液加完全培养液终止消化离心分离得原代间充质干细胞；过滤后收集剩余组织块再次消化得原代间充质干细胞；将原代间充质干细胞接种于完全培养液中，37℃，5％CO₂培养箱内静置培养；每隔数日更换一次培养液；扩增培养：待原代细胞长至80％汇合时，以TrypLE重悬细胞，于无血清培养液中扩增培养。本发明具备高效获取间充质干细胞的优点，而且获得的干细胞具有较高的细胞活性及分化潜能。

主权项

一种从脐带组织中高效获取间充质干细胞的方法，其特征在于步骤包括：(1)脐带MSCs细胞的分离：向洗净剪碎预处理后的脐带组织块内加入胰蛋白酶，在37℃水浴摇床上预消化后弃去消化液，用DPBS反复冲洗后，加入胶原酶I消化液置于37℃水浴摇床上消化，用细胞筛网过滤后收集到的滤液加入数倍体积的完全培养基终止消化，经离心分离得到一次沉淀物为原代MSCs细胞；细胞筛网过滤后收集到的剩余组织块重复上述消化至离心分离的步骤得到二次沉淀物原代MSCs细胞；(2)原代培养：将上述两次沉淀物合并后重悬于完全培养液中，接种至细胞培养瓶内，置于37℃，5％CO₂的培养箱内静置培养；细胞接种24小时后更换新鲜的完全培养液，以后每隔数日更换一次培养液，观察细胞的生长状态；(3)脐带MSCs细胞的扩增培养：待上述原代培养的细胞达到80％以上汇合时，吸弃细胞培养液，加入DPBS浸洗贴壁细胞多次，吸弃洗涤液，加入胰蛋白酶消化液，静置消化至贴壁细胞脱落，加入数倍体积的完全培养液终止消化，经离心分离所得的细胞沉淀加入aMEM培养液重悬并清洗细胞，重悬清洗多次所得细胞沉淀重悬于无血清培养液，并以数倍比例进行分瓶传代扩增培养得到脐带MSCs细胞。