在靶细胞中构建人工染色体的方法以及真核细胞

摘要

本发明提出了在靶细胞中构建人工染色体的方法及真核细胞，该方法包括：(1)提供多个一级核酸序列，并且沿着所述人工染色体的序列，相邻两个所述一级核酸序列之间存在一级核酸序列同源区；(2)利用组装体系，将所述多个一级核酸序列中的至少一部分进行组装，以便获得多个二级核酸序列；(3)将所述多个二级核酸序列的至少一部分引入靶细胞，使二级核酸序列与靶细胞的染色体发生同源重组，从而在所述靶细胞的染色体中形成三级核酸序列；(4)重复步骤(3)至少一次，以便在所述靶细胞中形成人工合成半染色体；(5)将位于不同靶细胞的两条所述人工合成半染色体通过同源重组整合形成人工染色体。利用该方法能够有效地在靶细胞中构建人工染色体。

主权项

一种在靶细胞中构建人工染色体的方法，其特征在于，包括：(1)提供多个一级核酸序列，所述多个一级核酸序列是基于所述人工染色体的序列以及所使用的组装核酸载体的序列而确定的，并且沿着所述人工染色体的序列，相邻两个所述一级核酸序列之间存在一级核酸序列同源区；(2)利用组装体系，将所述多个一级核酸序列中的至少一部分进行组装，以便获得多个二级核酸序列，所述二级核酸序列的至少一部分中含有与所述靶细胞的染色体同源的野生型同源区，并且沿着所述人工染色体的序列，相邻两个所述二级核酸序列之间存在二级核酸序列同源区；(3)将所述多个二级核酸序列的至少一部分引入靶细胞，以便使所述二级核酸序列与所述靶细胞的染色体发生同源重组，从而在所述靶细胞的染色体中形成由所述多个二级核酸序列的至少一部分组成的三级核酸序列，并且沿着所述人工染色体的序列，相邻两个所述三级核酸序列之间存在三级核酸序列同源区；(4)重复步骤(3)至少一次，以便在所述靶细胞中形成人工合成半染色体；以及(5)将位于不同靶细胞的两条所述人工合成半染色体通过同源重组整合形成人工染色体。