一种快捷的观赏海棠组培苗瞬时基因沉默的方法

摘要

本发明公开了一种快捷的观赏海棠组培苗瞬时基因沉默的方法，将沉默目的基因片段通过酶切连接的方式连接到TRV‑GFP载体，转化农杆菌后，通过调整真空抽吸压强和抽吸方式，将携带沉默目的基因的TRV‑GFP载体侵染入观赏海棠组培苗中；进一步通过抗生素培养和手提紫外灯荧光筛选，得到观赏海棠沉默阳性株系；沉默目的基因的观赏海棠组培苗阳性植株在侵染7天后，进行表型观察和半定量PCR筛选，从而构建完整的观赏海棠瞬时基因沉默体系。能够快速、高效的侵染观赏海棠组培苗植株，并能够方便进行沉默阳性植株筛选，进行基因沉默分析，改进了木本植物瞬时表达效率低等缺陷，能够应用于观赏海棠基因功能研究，为今后的观赏海棠遗传育种工作奠定基础。

主权项

一种快捷的观赏海棠组培苗瞬时基因沉默的方法，其特征在于，包括步骤：将沉默目的基因片段通过酶切连接的方式连接到TRV‑GFP载体，转化农杆菌后，通过调整真空抽吸压强和抽吸方式，将携带沉默目的基因的TRV‑GFP载体侵染入观赏海棠组培苗中；进一步通过抗生素培养和手提紫外灯荧光筛选，得到观赏海棠沉默阳性株系；沉默目的基因的观赏海棠组培苗阳性植株在侵染7天后，进行表型观察和半定量PCR筛选，从而构建完整的观赏海棠瞬时基因沉默体系。