主权项 |
一种小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的LAMP检测方法,其特征在于步骤如下:a)设计引物,引物序列为:<img file="FDA0001052777720000011.GIF" wi="1965" he="487" />b)小麦基因组的提取:田间取小麦幼苗3‑5g,洗净,放入液氮冷冻后利用Cwbiotech植物基因组DNA提取试剂盒提取小麦苗基因组;紫外分光光度计Nanodrop 2000检测DNA提取质量和浓度,选取OD260/OD280检测值为1.7‑1.9的DNA样品用于LAMP扩增;c)LAMP扩增:对步骤b)得到的基因组进行LAMP扩增,LAMP体系设置反应温度梯度为60℃、61℃和62℃;总体系25μL:其中引物FIP,BIP,F3,B3的比例为0.8μM:0.8μM:0.1μM:0.1μM或0.6μM:0.6μM:0.1μM:0.1μM,4mM MgSO<sub>4</sub>,1.6mM dNTPs,0.8M betaine,1μL Bst DNA polymerase;设置反应时间梯度为40min或60min;d)分析:对步骤c)得到的扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳或显色法分析;2%琼脂糖凝胶电泳出带状条带的为含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品,空白的为不含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品;显色法分析反应中有荧光的为含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品,没荧光的为不含有小麦高分子量谷蛋白亚基1Dx5的样品。 |