利用微生物转化生产糖苷类化合物的方法

摘要

本发明属于微生物转化技术领域，具体涉及一种利用微生物转化生产糖苷类化合物的方法。方法是平板培养，种子培养，微生物转化试验，糖苷化转化产物的提取。本发明的方法是微生物发酵培养到一定时间，添加一定浓度的降苦参酮溶液，微生物自身产生的酶对底物进行了结构修饰，发生了糖苷化反应，产生了高活性、低毒性的糖苷化转化产物；首次提出了利用微生物转化手段制备黄酮糖苷类天然产物，还获得了4个新的黄酮糖苷化产物。

主权项

一种利用微生物转化生产糖苷类化合物的方法，其特征在于步骤如下：(1)平板培养：用接种环挑取短刺小克银汉霉的菌丝体在PDA平板上划线，于恒温培养箱中培养，4℃保存，得到短刺小克银汉霉菌株平板；(2)种子培养：从短刺小克银汉霉菌株平板中用接种环挑取一环菌丝体，接种到有种子培养基的锥形瓶中，用棉塞封口后震荡培养，得种子液；(3)微生物转化试验：量取种子液加入到装有PDA培养基的无菌锥形瓶中，用棉塞封口后放于生物摇床中进行振荡培养，36小时后将降苦参酮丙酮溶液加入到PDA培养基中，继续培养，得发酵培养液；(4)糖苷化转化产物的提取：过滤发酵培养液，滤液用等体积的乙酸乙酯萃取，合并萃取有机相，真空减压浓缩至干，得转化残渣；将残渣溶解于丙酮，与硅胶拌样，以硅胶柱分离，氯仿‑丙酮梯度洗脱，收集馏分；该馏分以甲醇‑水为流动相，利用制备型高效液相分离得到转化产物2'甲氧基‑6"羟基‑降苦参酮‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(Ⅰ)和降苦参酮7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(Ⅱ)；馏分再进一步利用乙腈‑水系统分离得到转化产物6"羟基‑降苦参酮‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(Ⅲ)和7"‑羟基‑2'‑甲氧基‑降苦参酮‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(Ⅳ)。