具有耐受重金属特性的高效解磷日本曲霉菌剂的生产方法

摘要

本发明涉及一种利用甘薯淀粉废水和菌糠废渣生产具有耐受重金属特性的高效解磷日本霉菌剂的方法，属于环境生物技术领域。高效解磷日本曲霉菌（Aspergillus japonicus）是由我们实验室从湖南省湘西州花垣县的铅锌矿表层土壤中分离筛选出来的，具有耐受多种重金属的特性。该方法主要是以甘薯淀粉废水和菌糠废渣为主要培养基原料，采用液态‑固态联合发酵的方法生产耐受重金属特性的高效解磷日本曲霉菌剂。该菌剂的生产方法包括：培养基配制、菌种活化、液体种子制备、液态发酵、固态发酵、后处理6个步骤。本发明技术方案不仅为高浓度甘薯淀粉废水和菌糠废渣的资源化利用提供了一条新途径，而且生产的日本曲霉菌剂具有对环境友好，生产成本低的特点，产品还具有明显改善土壤环境质量、促进植株生长的功能。

主权项

一种利用甘薯淀粉废水和菌糠废渣生产耐受重金属特性的高效解磷日本曲霉菌剂的方法，其特征在于，生产方法包括如下步骤:I、培养基配制：1）菌种保藏培养基为固体，按1升计成分配比为：葡萄糖5 g，琼脂18‑20 g，40 g马铃薯煮沸过滤成的浸出液，加甘薯淀粉废水定容至1L，自然pH；2）菌种活化培养基为液体，按1升计成分配比为：葡萄糖5 g，40 g马铃薯煮沸过滤成的浸出液，加甘薯淀粉废水定容至1L，自然pH；3）种子培养基为液体，按10升计成分配比为：蛋白胨 10 g，葡萄糖 20 g，KH₂PO₄ 10 g，MgSO₄·7H₂O 5 g，加甘薯淀粉废水定容至10 L，自然pH；4）发酵培养基为液体，按200升计成分配比为：KH₂PO₄ 200 g，KH₂PO₄ 100 g，MgSO₄·7H₂O 20 g，加甘薯淀粉废水至200 L，自然pH；以上培养基均在121℃灭菌15‑30 min；II、菌种活化：挑取保藏编号为CGMCC No. 7700的日本曲霉菌至菌种保藏培养基，28℃连续划线、挑单菌落培养两次后，用无菌水配制孢子悬液，通过血球板计数法确定孢子悬液浓度为1.0×10⁸个孢子/mL，按5%（V/V）接种量挑取单菌落在菌种活化培养基中，于28℃，150 r/min摇床振荡培养4d；III、液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％‑10％的接种量接种所述日本曲霉菌，于25‑30℃，通空气好氧培养48‑72 h，得到液体种子；IV、液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％‑10％的接种量接种所述日本曲霉菌液体种子，于25‑30℃，通空气好氧培养48 ‑ 72 h，得到活菌体培养物；V、固态发酵：以蘑菇渣为支持物，将培养好的液态种子或液态日本曲霉菌产物按照2.5‑4倍重量添加到蘑菇渣物料中，搅拌均匀，于25‑30℃，静态培养5‑15天，得到固态日本曲霉菌产物；VI、后处理：将固态日本曲霉菌发酵产物经通风干燥处理，使其含水量小于30%，粉碎，包装，保存于干燥阴凉处。