一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法

摘要

本发明公开了一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法，属于壳寡糖的制备技术领域。本发明从蜗牛内脏中提取蜗牛酶，将其负载在阳离子染料废水改性后的凹凸棒土上，得到自制固定化蜗牛酶，再利用其酶解壳聚糖，喷雾干燥后，从而得到利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法。实例证明，本发明方法独特新颖，通过阳离子染料废水改性凹凸棒土，拓宽其层间距，增加了蜗牛酶的负载量，制得高效降解酶，解决了传统酶解法降解菌种单一，效率低的问题，而利用高剪切对壳聚糖进行增容、促溶预处理又弥补了壳聚糖酶解反应中浓度低，使生产的能耗水平和生产成本增加的不足，且生产工艺简单，产品得率高，对环境无污染，适合大规模生产。

主权项

一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）挑选1～2kg体重30～40g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积3～5倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理30～40min；（2）破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在10～15℃下以7000～9000r/min转速离心处理10～15min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1000～1200Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；（3）称取100～200g凹凸棒土浸入其体积5～8倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤1～2h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附10～12h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；（4）称取400～500g壳聚糖倒入6～8L去离子水中，转入高剪切分散机以2500～3000r/min转速剪切分散处理20～30min，再加入100～200mL冰醋酸，升高温度至45～55℃继续剪切5～10min后，补加200～300g壳聚糖和50～100mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；（5）将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量5～8%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至4～5，移入恒温箱中在40～50℃下保温酶解5～7h；（6）将上述酶解产物移入卧式离心机，在4000～5000r/min转速下离心分离5～10min得到上清液，再将上清液以20～30mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。