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酶解法分离高分子量肝素钠的方法，使肝素钠精品分子量在15000‑19000道尔顿之间，并且8000‑16000道尔顿的分子量比例与16000‑24000道尔顿之间分子量比例的比值不小于1.0，其特征在于：采用酶解过程中通过调节胰蛋白酶和胃蛋白酶的用量以及分次时间将肝素钠中的大分子量肝素钠分解，其步骤包括：一、提取1、粗品溶解：开启水阀，加入饮用水，再将肝素钠粗品加入到反应罐中，边搅边加，按原料与饮用水1∶(6‑7)比例溶解，搅拌5‑10小时至全部溶解；2、酶解：将上一步溶解液，先用盐酸溶液调pH至7.0‑8.0，升温至50‑55℃之间时加入胃蛋白酶5‑10g/亿单位，再加入10‑20g/亿单位胰酶，50‑55℃保温4小时，4小时后，再加胃蛋白酶3‑5g/亿单位，同时加入5‑10g/亿单位的胰蛋白酶，50℃继续保温4小时；3、急升温：将上一步酶解液在30～40分钟内升温至85‑90℃，静置10‑30分钟，开始搅拌，通入循环水降温，待温度降至50‑55℃时，用2‑6mol/L氢氧化钠溶液调pH10.0‑12.0，静置分层20‑30小时；4、底部沉淀的杂质离心：虹吸上清，用40‑100目滤袋过滤，过滤后的溶液分为上清液和下层沉淀，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；二、精制1、第一次沉淀：待上述上清液和离心液温度降至20‑30℃，加入20‑30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸将滤液调pH10.0‑12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10‑12小时；2、第一次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调pH10.0‑12.0，然后加入体积3‑5％双氧水，氧化10‑12小时；3、第二次沉淀：溶液加入20‑30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调将溶液pH6.0‑7.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10‑12小时；4、第二次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调pH10.0‑12.0，然后加入体积3‑5％双氧水，氧化10‑12小时；5、第三次沉淀：溶液加入20‑30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调pH6.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10‑12小时；6、第三次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调pH10.0‑12.0，然后加入体积3‑5％双氧水，氧化10‑12小时；7、第四次沉淀：上一步溶液若有沉淀物析出，则用离心机离心，没有析出则直接加入20‑30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调pH6.0‑7.0，将溶液放冷库中冷冻至‑10℃‑‑5℃，边搅边加‑10℃‑‑5℃的丙酮，使得丙酮占溶液的质量百分含量为40‑45％，‑5℃‑0℃保温24‑30小时，然后将废丙酮弃去，留底部沉淀物用纯化水溶解，溶液再加入20‑30g/L氯化钠，用盐酸溶液调将溶液pH6.0‑7.0，边搅边加乙醇，使乙醇浓度在20℃时为45‑50％，沉淀10‑12小时；8、将沉淀物用纯化水按2‑5L/亿单位溶解后，用孔径0.22‑0.3微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，使乙醇浓度达75‑80％，再加入23‑26％的氯化钠溶液，每1升溶液加6‑10ml氯化钠溶液，静置沉淀10‑12小时；9、将上层乙醇弃去，加入无水乙醇脱水，边搅边加，使乙醇浓度为97‑99％，静置24‑30小时，弃去上层乙醇，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通过管道和过滤瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；10、将抽干的产品均匀放置在不锈钢盘中，放在真空干燥箱中抽真空，用循环水加温，温度35‑60℃，烘干70‑80小时；11、包装：将产品取出，称重，使每包装袋5kg，用封口机封口，放在铝桶中待验。 |
