两株纤维堆囊菌的转化方法

摘要

本发明公开了两株纤维堆囊菌的转化方法。鉴于目前纤维堆囊菌的转化方法和可用质粒载体相对较少，因此本发明选用带双抗性的穿梭质粒载体和广宿主载体分别将外源基因（vgb）导入至两株纤维堆囊菌中，为建立纤维堆囊菌的遗传操作体系并促进纤维堆囊菌的基因工程改造奠定基础，从而提高纤维堆囊菌中活性次级代谢产物的丰度和产量。

主权项

一种纤维堆囊菌So ce M1的转化方法，其特征在于，包括以下步骤：a.原生质体的制备：以体积分数2.5％的接种量将纤维堆囊菌So ce M1接种至液体培养基，培养至对数生长期，离心得到菌体，用PBS溶液洗涤2次，再用体积分数14％甘露醇溶液充分悬浮So ceM1细胞，然后用质量分数15％EDTA溶液处理细胞30min，PBS洗涤，再用3mg/ml溶菌酶于30℃作用2h，用体积分数14％甘露醇溶液充分洗涤以去除残留酶液，得到纤维堆囊菌So ce M1的原生质体；b.原生质体的转化：在纤维堆囊菌So ce M1的原生质体中加入重组质粒PBEP43‑vgb，于冰上混合30min，加入体积分数40％PEG溶液于30℃作用10min,然后于含体积分数10％甘露醇的液体培养基中复壮24h，涂布于含有50μg/mL卡那霉素和100μg/mL氨苄青霉素的固体平板，经筛选得到含有重组质粒PBEP43‑vgb的纤维堆囊菌So ce M1；所述的液体培养基按如下配方配制：8g/L马铃薯淀粉，2g/L葡萄糖，2g/L大豆蛋白酶解物，2g/L酵母提取物，8mg/L EDTA铁钠，1g/L MgSO₄.7H₂O，1g/L CaCl₂，0.5g/L Tris，溶剂为水，用盐酸调pH至7.4。