一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法

摘要

本发明公开了一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法，属于植物的组织培养技术领域。该方法通过基本培养基设置、不同激素成份及浓度水平配比优化，以成年优株基部萌枝为外植体，经腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养，形成完整植株，移栽到基质后，得到生长整齐、表型一致的健壮苗木；造林成活率高，林相整齐。本发明克服了米老排外植体无菌性建立时污染率高、增殖培养时芽伸长生长慢、增殖倍率低、生根率低等问题，可进行规模化快速育苗，生产出健壮、整齐一致的米老排幼苗，生产成本低，为实现米老排优良单株的无性化推广，为提高米老排人工林的经济效益提供技术支撑和良种保障，应用前景广阔。

主权项

一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体采集：选取干型通直圆满、生长速度快、无病虫害的优良单株为母本，剪取树干基部萌枝，去叶后用纯净水清洗干净，备用；(2)外植体消毒和腋芽诱导：将枝条用无菌水清洗一遍，再依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒，用无菌水冲洗后接种到诱导分化培养基，放到培养室培养，得到腋芽；(3)增殖培养：将步骤(2)的腋芽切下并转接到增殖培养基上进行培养，得到增殖苗；(4)生根培养：从步骤(3)得到的增殖苗中切取芽转接至生根培养基上进行培养，得到组培生根苗；(5)炼苗与移栽：将步骤(4)得到的组培生根苗移到温室进行炼苗移栽，得到容器苗；步骤(2)中所述的诱导分化培养基为MX培养基+0.2～2.0mg/L 6‑BA+0.02～0.2mg/L NAA+25～40g/L蔗糖+8g/L卡拉胶；pH为5.8‑6.0；所述的MX培养基含有如下成分：720mg/L NH₄NO₃+400mg/L KNO₃+660mg/L Ca(NO₃)₂·2H₂O+370mg/L MgSO₄·7H₂O+170mg/L KH₂PO₄+65mg/L KCl+22.3mg/L MnSO₄·4H₂O+8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O+6.2mg/L H₃BO₃+0.83mg/L KI+0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O+0.25mg/L CuSO₄·5H₂O+0.05mg/L NiSO₄·6H₂O+0.025mg/L CoCl₂+27.8mg/L FeSO₄·7H₂O+37.3mg/L Na₂·EDTA·H₂O+150mg/L肌醇+2.0mg/L甘氨酸+0.5mg/L盐酸硫胺素+0.2mg/L烟酸+0.2mg/L盐酸吡哆醇；pH5.8、121℃灭菌15‑20分钟；步骤(3)中所述的增殖培养基为MX培养基+0.5～1.5mg/L 6‑BA+0.05～0.15mg/L NAA+25～40g/L蔗糖+8g/L卡拉胶；pH为5.8‑6.0；所述的培养采用如下方法进行：于25±2℃、60μmol·m^‑2·s^‑1光照12h/d；步骤(4)中所述的生根培养基为MX培养基+0.1～0.5mg/L NAA+15～20g/L蔗糖+7g/L卡拉胶；pH为5.8‑6.0。