湖泊水生植物中有机磷提取及组成分析方法

摘要

本发明公开了一种湖泊水生植物中有机磷提取方法，包括样品采集、磷的基本组成测定、有机磷(P_o)的提取、样品测试预处理、液态核磁(³¹P‑NMR)分析和计算步骤。本发明采用0.5mol/L NaOH+25mmol/L EDTA提取剂，水生植物粉末样品与提取剂的固液比为1：60获得最优的P_o提取效果；³¹P‑NMR分析测试过程中，设置延迟时间(D₁)为5s，扫描分析时间为15h可获得较好的谱图。本发明的水生植物P_o的提取方法，总磷(TP)和P_o的平均提取率分别在91.4％和88.1％以上，能准确检测出样品中P_o的具体种类和含量，准确的反映湖泊中水生植物的P_o的组成结构特征。为研究湖泊水生植物中P_o的生物地球化学特征及其在水华暴发中所起的贡献提供科学依据。

主权项

一种湖泊水生植物中有机磷提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品采集：采集湖泊水生植物全株，装入密封袋冷藏保存，运回实验室进行冷冻干燥，冷干后充分研磨，过2mm筛，得到水生植物粉末样品，‑20℃冷冻保存备用；(2)磷的基本组成测定：总磷TP、无机磷P_i和有机磷P_o的测定，取水生植物粉末样品两份，一份于马弗炉中煅烧，样品降至室温后加入HCl振荡，离心分离后分析其中磷浓度，即TP含量；另一份样品置于离心管中，加入HCl振荡，离心后测定磷浓度，即P_i含量；水生植物中P_o的含量由TP和P_i相减得到；(3)P_o的提取：取水生植物粉末样品加入提取剂，室温下振荡、离心后，留取上清液，冷冻干燥形成粉末样品，冷冻保存备用；(4)样品测试预处理：将步骤(3)得到的粉末样品用NaOH溶解，离心，加入D₂O锁定信号；(5)³¹P‑NMR分析：采用BRUKER标准腔5mm BBO探头，³¹P的共振频率为161.98Hz，测定温度为20℃，谱峰宽度为5Hz，获取时间AQ为0.2102s，NMR参数中延迟时间D1的设置为5s，分析测试时间为15h；(6)计算：通过步骤(5)中得到的波谱进行积分及对各磷组分进行定性分析，并根据步骤(2)得到的TP含量计算水生植物中各磷组分的含量。