从乳汁中分离和培养奶牛乳腺上皮细胞的方法及专用培养基

摘要

本发明公开了一种从乳汁中分离和培养奶牛乳腺上皮细胞的方法及专用培养基。本发明公开一种从牛乳汁中分离和培养乳腺上皮细胞的方法，包括如下步骤：选择牛乳汁中体细胞数低于5×10⁴个/ml并且处于泌乳中后期的牛，采集牛乳汁；分离并培养牛乳汁中的乳腺上皮细胞。本发明公开的方法通过奶牛生产记录限定适宜乳汁采样牛只的条件以及确定收集期为泌乳中后期，通过人工挤奶方法，简便、快速，经济的获得牛奶样品，并分离、培养乳腺上皮细胞，结果可靠、稳定，操作简单，适合常规实验室实验需要，成本低、细胞状态好，同时与组织块培养法相比，仅需获得牛乳样品，对牛只没有损伤，操作简单，适用范围更广。

主权项

一种从牛乳汁中分离和培养乳腺上皮细胞的方法，包括如下步骤：选择牛乳汁中体细胞数低于5×10⁴个/ml并且处于泌乳中后期的牛，采集牛乳汁；分离并培养牛乳汁中的乳腺上皮细胞；所述分离并培养牛乳汁中的乳腺上皮细胞包括分离并培养原代牛乳腺上皮细胞，再将原代牛乳腺上皮细胞进行传代培养，得到传代的牛乳腺上皮细胞；所述原代牛乳腺上皮细胞和传代的牛乳腺上皮细胞培养时使用的培养基按照如下方法制备：将DMEM/DF12培养基和FBS按照体积比为9：1混匀，加入终浓度为1×的青霉素，终浓度为1×的链霉素，终浓度为5ug/mL的胰岛素，终浓度为5ug/mL的转铁蛋白，终浓度为5ug/mL的氢化可的松，终浓度为10ng/mL的表皮生长因子，终浓度为1ug/mL的孕酮，终浓度为10ng/mL的重组牛胎盘催乳素；所述DMEM/DF12培养基购自Gibco，产品目录号为C11330500BT；所述终浓度为1×的青霉素和终浓度为1×的链霉素的母液是浓度为100×的青霉素/链霉素双抗溶液；所述浓度为100×的青霉素/链霉素双抗溶液的商品名称为青霉素/链霉素双抗溶液(100×)，购自Gibco，产品目录号为15140‑122；所述重组牛胎盘催乳素购自Prospec，产品目录号为CYT‑511。