采用反转录环介导等温扩增技术检测芜菁花叶病毒的方法

摘要

本发明涉及采用反转录环介导等温扩增技术检测芜菁花叶病毒的方法，其中该方法包括芜菁花叶病毒总RNA提取，RT‑LAMP反应和实时浊度检测以及电泳检测，确定样品是否带有TuMV病毒。本发明根据芜菁花叶病毒的基因保守区设计了RT‑LAMP引物，采用一步法反转录环介导等温扩增技术建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测芜菁花叶病毒的方法。为芜菁花叶病毒的快速检测提供了新的手段。

主权项

一种采用反转录环介导等温扩增技术检测芜菁花叶病毒(TuMV)的方法，其特征在于包括下述步骤：1)扩增步骤：使用引物，从待检查标本提取RNA后，以所提取的RNA为模板，通过环介导等温扩增法进行RNA的扩增反应；2)判断步骤：检视反应液浊度变化，从分子水平检查所述扩增步骤中是否包含芜菁花叶病毒碱基序列，以判断是否存在芜菁花叶病毒，所述反转录环介导等温扩增技术检测芜菁花叶病毒采用的引物如下：外引物F3和B3：SEQ ID NO.1：5’‑CGGAACCTCCCCGAACAT‑3’；SEQ ID NO.2：5’‑ATCGAGCTAAGCTCATGTCG‑3’；内引物FIP和BIP：SEQ ID NO.3：5’‑GTTTGGCGTGGTCAATGAGCGAAACGGAATGTGGGTGATGA‑3’；SEQ ID NO.4：5’‑GGCCCATTTCAGTGACGTAGCTCTGAAGACCATATCGTGGCA‑3’。