一种诱导羊膜间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法

摘要

本发明提供了一种诱导羊膜间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法，所述分化方法步骤为：将羊膜间充质干细胞种于培养瓶中，用正常培养液培养至其汇合度达到80‑90％；在培养液中加入25μmol/L的5‑氮胞苷，处理24小时；将细胞培养液更换为诱导培养液：IMEM基础培养基+2％FBS+20ng/ml HGF+20ng/ml FGF2+2.5mmol/L nicotinamide+10μmol/L SB431542，每隔2天换液，共7天；将细胞培养液更换为成熟培养液：IMEM+2％FBS+20ng/ml HGF+20ng/mlOSM+1μmol/L Dex，每隔两天换液，共14天。本发明诱导效率高，所述方法操作简单，可为临床提供很好地细胞来源。

主权项

一种诱导羊膜间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法，其特征在于，所述方法步骤为：A)将胎盘羊膜中分离出来的间充质干细胞，用含有10％胎牛血清和10ng/mlEGF的低糖DMEM培养液在37℃、5％CO₂及饱和湿度的孵箱中进行培养；当细胞传至第五代时，通过流式分析对其表面标志物进行检测以及通过成脂、成骨分化实验验证其具有多潜能分化能力；将鉴定好的高纯度的间充质干细胞按5×10⁴/cm²的密度种于T75培养瓶中，加入15ml正常培养液进行培养；待其汇合度达到80‑90％时，在培养液中加入25μmol/L的5‑氮胞苷进行预处理，其目的是抑制细胞增殖；预处理24小时后，进入步骤B；B)将细胞培养瓶中原有培养液吸走，加入15ml 37℃预热的诱导培养液；所述诱导培养液的配方为：IMEM基础培养基+2％FBS+20ng/ml HGF+20ng/ml FGF2+2.5mmol/L nicotinamide+10μmol/L SB431542；每隔2天更换一次诱导培养液，诱导时间为7天；C)在第8天时，将细胞培养瓶中原有的诱导培养液吸走，加入15ml 37℃预热的成熟培养液，所述成熟培养液的配方为：IMEM基础培养基+2％FBS+20ng/ml HGF+20ng/ml OSM+1μmol/L Dex；每隔2天更换一次成熟培养液，成熟时间为14天。