一种牡蛎活性肽的制备方法及用途

摘要

本发明提供一种牡蛎活性肽的制备方法，通过将新鲜牡蛎肉高速匀浆、离心、调pH至中性，得牡蛎粗蛋白；将牡蛎蛋白悬浊液离心，高速分散器均质，加入Papain，维持溶液pH值恒定，将反应物加热灭酶，冷却，得到牡蛎蛋白冻干粉；再配成溶液搅拌、离心，上清液用生物传感器测定高温灭酶后的牡蛎酶解液中氨基酸的含量，通过Sephadex G‑25层析柱对牡蛎酶解液进行分离，洗脱，冻干后凝胶柱脱盐得到牡蛎活性肽。本发明得到的牡蛎酶解液中总氨基酸的含量高，有效保护了生物成分活性，可显著拮抗双酚A所致的卵巢颗粒细胞功能干扰效应，可在制备治疗化学环境干扰物双酚A暴露所致的卵巢功能紊乱的药物中应用。

主权项

一种利用木瓜蛋白酶制备牡蛎活性肽的方法，通过提取牡蛎粗蛋白、酶解及分离，其特征在于，具体通过以下步骤实现：（1）在新鲜牡蛎肉中加入预冷的双蒸水，高速匀浆后放入4 ℃冰箱内静置，4℃离心，取上清液，冷藏，取上清液以HCL调溶液pH至4，8000r/min离心，取上清液，用NaOH调pH至9，再离心分离，上清液以HCL调至中性即为牡蛎粗蛋白；（2）用蒸馏水准确配制5.0%的蛋白悬浊液，先将牡蛎蛋白悬浊液置于4℃冰箱12小时，再用高速冷冻离心机离心，收集上清液，用高速分散器均质，置于恒温酶反应器内预热至温度50℃，然后用NaOH 调节至pH值8.5，继续搅拌，然后加入木瓜蛋白酶启动反应，反应过程中连续搅拌，滴加NaOH 维持溶液pH值恒定，反应结束后，将反应物立即在95 ℃ 加热10 min灭酶，然后迅速用流水冷却，酶解物4 ℃、离心，收集上清液冷冻干燥，得到牡蛎蛋白冻干粉；（3）取牡蛎蛋白冻干粉，用双蒸水配成20 mg/mL 的溶液，搅拌，用HCL 或NaOH调pH值至8.5，待pH 稳定后再连续搅拌浸提，离心，上清液用生物传感器测定高温灭酶后的牡蛎酶解液中氨基酸的含量，通过Sephadex G‑25层析柱对牡蛎酶解液进行分离，以超纯水为洗脱液洗脱，收集各洗脱峰，冻干后，凝胶柱脱盐得到牡蛎活性肽。