一种HPV特异性抗体的制备方法及冻干制剂

摘要

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种HPV特异性抗体的制备方法及冻干制剂。所述HPV特异性抗体的制备方法，包括制备抗原，用所述抗原免疫鸡得到抗体，再进行酶解纯化得到HPV特异性抗体。所述抗HPV感染抗体的冻干制剂包括如下重量份比的原料制备而成：聚乙二醇0.5‑8份；甘露糖5‑80份；海藻糖1‑70份；蔗糖0.1‑10份；甘氨酸0.1‑5份；精氨酸0.1‑5份；缓冲盐0.01‑1份；还包括：上述所得HPV特异性抗体0.01‑0.5mg/ml。本发明HPV特异性抗体与预防性HPV疫苗相比较，具有作用时间短、起效快、不受到年龄段的限制等优点。

主权项

一种HPV特异性抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)特异性抗原制备，所述抗原包括HPV‑16/18亚型的L1和L2的17‑36肽段、受体蛋白和协助蛋白酶；2)抗体制备：采用蛋鸡作为免疫动物使用步骤1)抗原进行免疫，得含有特异性抗体的鸡蛋卵黄；3)步骤2)所得鸡蛋卵黄经过水稀释、PEG沉淀步骤得初级提取液；4)将初级提取液用DEAE‑Sepharose 5Pw弱阴离子交换树脂进行分离纯化得次级提取液，所述次级提取液的特异性抗体的纯度大于85％；5)将分离得到目的蛋白进行浓缩，所述浓缩为PEG包埋、50％‑80％甘油透析或超滤浓缩，得浓缩液，所述浓缩液蛋白含量为3‑8mg/ml；6)将步骤5)所得浓缩液用木瓜蛋白酶的酶液酶解，所述酶液总木瓜蛋白酶的浓度为0.005‑0.1mg/ml，溶剂为EDTA‑消化缓冲液，酶解时按照酶液：所述浓缩液＝1:50的比例混合，然后至于37℃的环境中，酶解2‑3小时，用1Mol/L的磷酸氢二钠溶液调节pH至7.4；7)将步骤6)所得酶解产物用sephadexG‑25/75进行分离，sephadex在分离前应用PBS平衡5‑10倍柱体积，并且通过紫外检测器观测到基线达到平稳后再上样，上样体积为1/30的柱体积；特异性抗体会在紫外检测器探测到的第三或四个峰时流出，为了避免酶解不彻底产生的信号干扰，应在第二个峰时开始收集馏分，最后通过SDS‑PAGE检测各馏分中的蛋白组分，以确定目的片段，确定目的片段后，将馏分用超滤浓缩的方式进行浓缩使其浓度在2‑5mg/ml之间，所得为特异性抗体。