一种基因工程包涵体的洗涤方法

摘要

本发明公开了一种基因工程包涵体的洗涤方法，该方法采用中空纤维膜处理基因工程包涵体的洗涤，可实现连续自动操作，工艺过程简单，操作方便，提高了生产效率，得到的包涵体收率高、纯度高、特别适合于大规模工业化生产上的应用。

主权项

一种基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于包括如下步骤：a、膜平衡：取中空纤维膜，用纯化水润洗平衡，调整进水流速使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH；b、第一次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅰ，按5～15：1V/W加入包涵体，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15bar，透过通量为10～30 LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅰ的组成为20～100 mM Tris‑HCl，1～5% 曲拉通‑X‑100，pH9.0，或者组成为20～100 mM Tris‑HCl，1～5% 吐温‑20，pH9.0；c、第二次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅱ，按5～15：1V/W加入步骤b处理后的包涵体浓缩液，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅱ的组成为20～100 mM Tris‑HCl，2～4 M 尿素，pH9.0，或者组成为20～100 mM Tris‑HCl，1～3M 盐酸胍，pH9.0；d、第三次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅲ，按5～15：1V/W加入步骤c处理后的包涵体浓缩液，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅲ的组成为20～100 mM Tris‑HCl，pH9.0。