一种脱毒白背三七组织细胞的培养方法

摘要

本发明涉及农业生物技术中植物细胞培养的方法，尤其涉及一种脱毒白背三七组织细胞的培养方法，包括以下处理步骤：1)、白背三七外植体初代愈伤组织细胞团诱导，2)、愈伤细胞团的继代筛选，3)、白背三七悬浮细胞的制备，4)、白背三七单细胞的大量克隆；5)、单细胞定向诱导形成组织细胞团。本发明通过液体组培的方式及进行培养条件和营养因子的调控，来脱除白背三七中的吡咯里西啶生物碱，同时又提高了其他活性成份的含量，如黄酮、多糖、萜烯等化合物。

主权项

一种脱毒白背三七组织细胞的培养方法，其特征在于，包括以下处理步骤：1)、白背三七外植体初代愈伤组织细胞团诱导：采集白背三七的外植体，对外植体进行表面消毒：将外植体切成合适大小后接入B1培养基中25℃，暗培养10～20天，即可获得初代愈伤组织细胞团；2)、愈伤细胞团的继代筛选:选取长势较好、无明显褐化的初代愈伤细胞团转入B2培养基中，25℃，暗培养，每隔10～20天为一个继代周期，经过3～6个的继代筛选培养，即可获得疏松、娕黄色的愈伤细胞团；3)、白背三七悬浮细胞的制备:将经过继代筛选获得的愈伤细胞团转入B3培养基中，25℃，弱光培养，每隔15～30天为一个继代周期，经过3～6个的继代筛选培养，即可获得悬浮单细胞或小细胞团；4)、白背三七单细胞的大量克隆:将白背三七的悬浮细胞以10⁵～10⁶个/mL的浓度转入B3培养基中，25℃，弱光培养10～20天，可获得大量的细胞种源；5)、单细胞定向诱导形成组织细胞团:将优质种源细胞以10⁵～10⁶个/mL的浓度转入装有B4培养基大型光照通气悬浮培养罐中，25℃，1000～3000lux光照培养20～30天，最终即可获得脱毒的白背三七组织细胞团。