一种检测胰腺癌相关多肽DAP44的ELISA试剂盒

摘要

本发明利用前期合成和筛选的一对高效特异DAP44单克隆抗体，制备了DAP44ELISA检测试剂盒。所合成的ELISA试剂盒包括特异性DAP44抗体包被的酶标板、酶标试剂、洗涤缓冲液、样品稀释液、显色剂A液、显色剂B液、终止液、DAP44标准品。采用双抗体夹心ELISA方法，在微孔条上预包被DAP44抗体，使血清样本中的DAP44结合固定在酶标板微孔表面的抗体，加入HRP偶联DAP44二抗后，形成抗体‑抗原‑酶标抗体复合物，底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，将样本吸光值与标准曲线比较即可得出相应DAP44的含量。本发明试剂盒具有高敏感性，有助于胰腺癌临床检测。

主权项

一种ELISA试剂盒，其特征在于，包括：特异性DAP44抗体包被的酶标板、酶标试剂、洗涤缓冲液、样品稀释液、显色剂A液、显色剂B液、终止液、DAP44标准品和标准品稀释液，其中酶标板上的单克隆抗体由保藏号为CCTCC C201564的杂交瘤细胞所产生，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体由另一株保藏号为CCTCC C201565的杂交瘤细胞产生；其中DAP44如序列表1所示；酶标试剂：包含5.8g/L磷酸氢二钠、0.593g/L磷酸二氢钠、8.0g/L氯化钠、200ml/L小牛血清、0.5ml/L Proclin‑300和0.4mg/L辣根过氧化物酶标记的胰腺癌相关抗原DAP44单克隆抗体；洗涤缓冲液pH 7.4 0.15M PBS：KH₂PO₄ 0.2克，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9克，NaCl 8.0克，KCl 0.2克，Tween‐20 0.05％0.5ml，加蒸馏水至1000ml；样品稀释液：牛血清白蛋白0.1克，加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清与洗涤液配成5～10％使用；显色剂A液为H₂O₂，显色剂B液为TMB；终止液为2M H₂SO₄。