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一种同时测定免疫球蛋白发酵液样品的糖基化和末端修饰情况的方法，所述方法包括以下步骤：1)使用亲和色谱初步纯化免疫球蛋白，并使用超滤离心装置浓缩样品；2)使步骤1)中浓缩后的免疫球蛋白经变性剂变性后，使用还原剂还原，从而拆分轻链和重链；其中，所述步骤2)包括：向一定量的免疫球蛋白中加入10‑30μL的1‑6M盐酸胍水溶液，混合均匀后加入1‑4μL二硫苏糖醇(DTT)水溶液,使免疫球蛋白发生变性、还原反应，其中，反应溶液中DTT终浓度为25‑100mM，免疫球蛋白终浓度为0.2‑3μg/μL，其中，所述步骤2)中免疫球蛋白发生变性、还原反应温度为50‑65℃，反应时间为45min‑120min；3)使用反相超高压液相色谱分离步骤2)中免疫球蛋白的轻链和重链，其中，所述步骤3)中的色谱条件设定为：色谱柱温度设定为60℃，进样量1μg；流动相X为0.1％甲酸水，流动相Y为0.1％甲酸乙腈，流速为0.4mL/min；梯度洗脱条件为：0‑5min,10％Y，90％X；5‑5.1min,10％‑25％Y，75％‑90％X；5.1‑6min,25％‑26％Y，74％‑75％X；6‑10min,26％‑27％Y，73％‑74％X；10‑15min,27％‑32％Y，68％‑73％X；15‑15.1min,32％‑90％Y，10％‑68％X；15.1‑18.0min,90％Y，10％X；18.0‑18.1min,90％‑10％Y,10％‑90％X,18.1‑21.0min,10％Y，90％X；4)使用质谱测定步骤3)中获得的轻链和重链的分子量；以及5)分析步骤3)中的色谱数据和步骤4)中的质谱数据，从而测定所述免疫球蛋白的糖基化和末端修饰情况。 |
