发明名称 | 一种人原代气道上皮细胞培养方法 | ||
摘要 | 本发明提供一种人原代气道上皮细胞的培养方法,通过清除气道脂肪及纤维组织,切成小块贴在预铺有IV胎盘胶原的24孔培养板中,加入150μl BMGM培养基,待上皮细胞从组织块边缘爬出,密度达70%时将组织块移至新的预铺IV胶原的孔内继续培养,重复5‑8次,至细胞增殖80‑90%丰度时,用胰酶‑EDTA消化;采用差异贴壁法去除成纤维细胞后,加入BEGM培养基重悬上皮细胞,接种于新的预铺IV胎盘胶原的培养皿中,传代比例不大于1:3,每3天换液1次,即完成细胞培养。本发明培养方法设计合理,结果稳定,重复性好,培养的细胞形态均一,生长良好,且具有典型的气道上皮细胞细胞的形态及特点。 | ||
申请公布号 | CN105820996A | 申请公布日期 | 2016.08.03 |
申请号 | CN201610247201.0 | 申请日期 | 2016.04.18 |
申请人 | 浙江大学 | 发明人 | 夏旸;富祯祯;王绍斌;张斌;李雯;沈华浩 |
分类号 | C12N5/071(2010.01)I | 主分类号 | C12N5/071(2010.01)I |
代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人 | 张法高;赵杭丽 |
主权项 | 一种人原代气道上皮细胞培养方法,其特征在于:通过以下步骤实现:(1)收集带有气道的肺组织样品,将组织样品储存在预冷的含有双抗的无菌PBS溶液中;(2)在24孔细胞培养板内预铺IV型胎盘胶原醋酸溶液,置于超净台内过夜风干备用;(3)将步骤(1)组织样品放入含预冷PBS的无菌培养皿中,在显微镜下分离出直径约1cm的气道,用预冷的含有双抗的无菌PBS溶液冲洗后,切块贴于步骤(2)制备的培养板中;(4)每个培养孔加入150μl的BEGM培养基,置入培养箱培养;(5)待上皮细胞从组织块边缘爬出,密度达70%时将组织块移至新的预铺IV胶原的孔内继续培养,由此获得原代气道上皮细胞;(6)当原代气道上皮细胞扩增至80‑90%丰度时,加入0.3‑0.5ml 0.1%‑0.2%胰蛋白酶溶液37℃消化1‑2分钟,加入1ml DMEM完全培养基终止消化并离心,采用差异贴壁法纯化上皮细胞后,用BEGM培养基重悬细胞,接种于预铺IV胎盘胶原的培养皿中,每3天换液1次,即完成传代细胞培养,获得传代培养的人气道上皮细胞。 | ||
地址 | 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |