识别基因型的方法

摘要

本发明涉及一种识别基因型的方法以及采用该方法来识别基因型所用的基因型识别用试剂盒，其中，所述识别基因型的方法中利用了PCR-PHFA法，并且包括下述核酸扩增工序和识别工序：核酸扩增工序，通过核酸扩增反应对具有试样中所含基因中的突变位点的区域进行扩增，获得含有试样双链核酸的扩增反应液；识别工序，通过将上述核酸扩增工序中所获得的扩增反应液与上述突变位点为特定基因型并且由标记物质所标记的标准双链核酸进行混合而发生竞争性链置换反应，并通过测定标准双链核酸与试样双链核酸之间链置换的发生程度来识别上述标准双链核酸与上述试样双链核酸的同一性；并且，上述竞争性链置换反应是在抑制聚合酶延伸反应的条件下进行。

主权项

延伸反应抑制剂、用于制备非标记的试样双链核酸的核酸扩增试剂、以及由标记物质所标记的标准双链核酸在制备试剂中的应用，所述试剂是识别基因突变中的基因型的检测中的试剂，其特征在于，在构成上述标准双链核酸的两条核酸链中，分别地，通过第一标记物质标记一条链的3′端部，通过第二标记物质标记另一条链的5′端部，上述第一标记物质和上述第二标记物质中的至少一者是荧光物质，上述识别基因型的检测包括：核酸扩增工序，通过由所述核酸扩增试剂进行的核酸扩增反应对具有所述试样中所含基因中的突变位点的区域进行扩增，获得含有所述试样双链核酸的扩增反应液；以及识别工序，通过将上述核酸扩增工序中所获得的扩增反应液与上述突变位点为特定基因型的所述标准双链核酸加以混合而进行竞争性链置换反应，并测定所述标准双链核酸与所述试样双链核酸之间发生链置换的程度，由此识别上述标准双链核酸与上述试样双链核酸的同一性，上述识别工序中的上述竞争性链置换反应，是在通过使上述竞争性链置换反应的反应液中作为上述延伸反应抑制剂的EDTA浓度调整为25～50mM从而抑制了由上述扩增反应液所夹带的聚合酶引起的延伸反应的条件下进行，并且，通过将含有上述标准双链核酸和上述试样双链核酸的反应液的温度从高温慢慢降低而进行，进而，基于由上述反应液的温度降低引起的荧光强度的变化量与由不含上述试样双链核酸而含上述标准双链核酸的对照反应液的温度降低引起的荧光强度的变化量的比值，测定所述识别工序中的所述标准双链核酸与所述试样双链核酸之间链置换的发生程度。