石斛盛开期花瓣总RNA提取方法

摘要

本发明公开了一种RNA质量及浓度较好的石斛盛开期花瓣总RNA提取方法，将‑80℃保存的0.1g盛花期花瓣在液氮中研磨成粉末后，转入1.5mL离心管中，加入1mL1.5％SDS裂解液涡旋1min；室温静置25min，4℃下取10000g离心l5min，取上清加入1/3体积8mol/L的LiCl溶液，混匀后‑20℃静置4h；4℃下取15000g离心30min，用0.6mL0.2mol/L的NaCl溶液重溶沉淀，加入等体积的酚‑氯仿‑异戊醇混合液，4℃下取12000g离心15min，吸取上清并重复抽提1次；加入等体积氯仿‑异戊醇，4℃下取12000g离心15min；吸取上清加入2倍体积的乙醇，‑80℃下放置1h，4℃12000g离心10min，将沉淀用75％乙醇洗涤2次，待RNA沉淀略干后，加30uL的DEPC处理水溶解。成本低、耗时短、操作简单，同时提取的RNA质量及浓度较好。

主权项

一种石斛盛开期花瓣总RNA提取方法，其特征在于，包括步骤：A、将‑80℃保存的0.1g盛花期花瓣在液氮中研磨成粉末后，迅速转入预冷的1.5mL离心管中，加入1mL1.5％SDS裂解液，涡旋1min；B、室温静置25min，4℃下取10000g离心l5min，取上清移至新的离心管中，加入1/3体积8mol/L的LiCl溶液，颠倒混匀后‑20℃静置4h；C、4℃下取15000g离心30min，弃上清液，用0.6mL0.2mol/L的NaCl溶液重溶沉淀，震荡助溶，加入等体积的酚‑氯仿‑异戊醇混合液，颠倒混匀，4℃下取12000g离心15min，吸取上清至新的离心管中，并重复抽提1次；D、加入等体积氯仿‑异戊醇，颠倒混匀，4℃下取12000g离心15min；E、吸取上清至新的离心管中，加入2倍体积的乙醇，‑80℃下放置1h，4℃12000g离心10min，将沉淀用75％乙醇洗涤2次，待RNA沉淀略干后，加30uL的DEPC处理水溶解。