一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及试剂盒

摘要

一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法及试剂盒，该方法是于样品中加入蛋白质和DNA双抽提液，充分研磨至样品细胞完全破碎；然后取等体积的2份样品，一份样品加入DNA增溶剂混匀，水浴后冷却，然后加入等体积的氯仿：酚(24:1)并充分混匀，静置后充分离心，取上清液检测DNA含量；另一份样品加入蛋白酶抑制剂后静置，充分离心，取上清液测定蛋白质含量；蛋白质含量与DNA含量的比值即为细胞内蛋白质相对含量[mg(protein)/mg(DNA)]。本发明提出了细胞内蛋白质相对含量的概念，基于该概念的检测方法及检测试剂盒具有无需称量样品或计算细胞数量，同份样品同时检测蛋白质和DNA，适宜各种复杂样品，操作简单，成本低廉等优点。

主权项

一种快速测定细胞内蛋白质相对含量的方法，其特征在于，该方法步骤如下：(1)按0.1g样品加2mL蛋白质和DNA双抽提液的比例，于样品中加入蛋白质和DNA双抽提液，充分研磨样品至样品细胞全部破碎，得样品溶液；(2)吸取2份等体积的样品溶液，其中一份样品溶液中加入DNA增溶剂，该DNA增溶剂的加入量为样品溶液体积的1/2，于50‑100℃水浴10‑30min，冷却至室温，然后加入与样品溶液等体积的氯仿与酚的体积比为24:1的混合液，混合均匀，静置5‑10min，离心，取上清液检测DNA含量；其中，DNA增溶剂为3‑6mol/L NaCl；(3)另一份样品溶液中加入蛋白酶抑制剂，该蛋白酶抑制剂的加入量为每1mL样品溶液加30μl蛋白酶抑制剂，静置10‑30min，离心，取上清液测定蛋白质含量；(4)计算蛋白质含量与DNA含量的比值，蛋白质含量与DNA含量的比值即为样品细胞内蛋白质相对含量。