一种检测人血清中总睾酮的方法

摘要

本发明公开了一种检测人血清中总睾酮的方法，该方法包括如下步骤：向含有人血清样品的试管中加入含睾酮内标物的内标液，混匀后加入甲基叔丁基醚进行蛋白沉淀并萃取待测物；离心后置于-65～-80℃条件下放置1-2h，接着转移上清液至另一试管中进行干燥，然后加入复溶剂，得到待测样品；对待测样品用高通量的液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；以睾酮的相对保留时间和检测的定量离子对的丰度比为定性依据，采用内标标准曲线法定量。本发明采用高通量的液相色谱串联质谱仪对人血清中的睾酮进行检测，检测时间短，通量高，灵敏度好，精密度高。

主权项

一种检测人血清中总睾酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)前处理向人血清样品的试管中加入含睾酮内标物的内标液，混匀后加入甲基叔丁基醚进行蛋白沉淀并萃取睾酮，然后离心后置于‑65～‑75℃条件下放置1‑2h，接着转移上清液并进行干燥，然后加入复溶剂，得到待测样品；其中，所述睾酮内标物为睾酮的碳代标记物；所述内标液与人血清样品的体积比为1:10～1:4；所述人血清样品、甲基叔丁基醚及复溶剂的体积比为2:8:1～2:15:1；(2)检测对所述待测样品采用高通量液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；其中色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；柱温为48‑52℃；流动相为甲醇和水，流速为0.5‑1ml/min，采用梯度洗脱：起始流动相甲醇:水的体积比为35:65，待测物出峰时流动相甲醇:水的体积比为60:40，而后再回到起始流动相甲醇:水的体积比为35:65，并保持1～2min，整个梯度的时间为3～8min；质谱条件为：采用正离子模式，扫描方式采用多反应监测离子扫描MRM；睾酮定量离子对的去簇电压为110v，入口电压为10v，碰撞电压为32v，出口电压为20v；睾酮内标的定量离子对的去簇电压为100v，入口电压为10v，碰撞电压为34v，出口电压为12v；离子源参数包括：电离源的电喷雾电离ESI源；气帘气压力为15psi；加热气压力为50psi；辅助加热气压力为50psi；加热气温度为400℃；碰撞气为高纯度氮气，压力为8psi；电喷雾针电压为4000v；目标定量离子的多反应监测离子扫描MRM的条件为：睾酮母离子的质/荷比为289.2～290.2，对应的子离子的质/荷比为97.1～98.1。