桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法

摘要

本发明涉及植物种质资源保护领域，特别是提供一种桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法，包括1)获取休眠枝条；2)剪成休眠芽段；3)干燥；4)密封；5)梯度降温；6)液氮保存；(7)化冻；8)回湿；9)嫁接复活。本发明的方法是一种利用干燥-梯度降温冷冻法进行桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法。将桑树休眠芽段进行干燥至含水量20％-40％，经缓慢逐级降温处理、冻存、化冻、回湿和嫁接复活等步骤，获得较高存活率。采用本发明提供的方法，桑树休眠芽段超低温保存后平均存活率最高可达95％。本发明提供的桑树休眠芽段的超低温保存方法程序简单，易于操作，冻存效果好，是桑树种质资源离体长期保存的一条有效途径。

主权项

一种桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法，其特征在于，包括如下步骤：1)获取休眠枝条；2)剪成休眠芽段；3)干燥；4)密封；5)梯度降温；6)液氮保存；(7)化冻；8)回湿；9)嫁接复活；步骤1)所述获取休眠枝条，为冬天从桑树上剪取带有健康休眠芽的一年生枝条；步骤2)所述剪成休眠芽段，为将步骤1)所获休眠枝条的中部条段剪成长4‑30cm长的节段，每段带1‑3个芽；步骤3)所述干燥为使休眠芽段含水量降低到质量百分含量20％‑40％；步骤5)所述梯度降温，为将步骤4)密封好的休眠芽段顺序以以下温度和时长降温：5℃1天，0℃1天，‑5℃1天，‑10℃1天，‑15℃1天，‑20℃1天，‑30℃2天。