一种用NsiI鉴定人乳腺癌BRCA1基因rs8176318多态性的方法

摘要

本发明公开了一种用NsiI鉴定人乳腺癌BRCA1基因rs8176318多态性的方法，通过创造酶切位点法，应用引物3’端错配技术，在PCR产物进行酶切电泳后进行基因型的鉴定，从而提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人BRCA1rs8176318多态性的方法及检测试剂盒。本发明对传统PCR-RFLP法进行改进，克服了传统PCR-RFLP法内切酶选择余地小，价格昂贵，实验成本高等缺点，本发明建立的BRCA1rs8176318多态性的检测方法，内切酶价格十分便宜，同时PCR产物纯度较高，酶切结果易于分辨。该检测方法通过测序验证，其结果准确可靠。

主权项

一种用NsiI鉴定人乳腺癌BRCA1基因rs8176318多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)抽提样品的基因组DNA；(b)提供扩增人BRCA1基因多态性rs8176318位点附近序列的正向引物和反向引物，以所述待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，获取扩增产物；(c)使用限制性内切酶对所述扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；(d)将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，以判定BRCA1基因多态性rs8176318位点的各基因型；其中，所述反向引物其3’末端倒数第一位碱基与多态rs8176318碱基相邻一个碱基，倒数第三位碱基为错配碱基T，在扩增产物中与多态T等位基因形成ATGCAT结构，第二个碱基T为多态等位基因，第六个碱基T为错配碱基。