发明名称 |
一种高活性人趋化因子的制备方法及用途 |
摘要 |
本发明公开了一种高活性人趋化因子的制备方法及用途,包括如下步骤:步骤1:根据NCBI数据库中Eotaxin-1的氨基酸序列,对其密码子进行了优化,人工合成目的基因;步骤2:通过设计引物在其N端引入一个或多个His标签、TEV酶切位点,并在N端和C端分别引入限制性酶切位点EcoR I和Hind III;步骤3:利用PCR技术将目的片段进行扩增,再将基因片段双酶切后连接到用相同酶切割后的载体上面,而后导入大肠杆菌中进行异源表达,生产Eotaxin-1蛋白。本发明方法提供了一种简便、快速、低成本、高产量、高纯度的细胞趋化因子Eotaxin-1的制备方法,并对其活性进行了验证。 |
申请公布号 |
CN105695495A |
申请公布日期 |
2016.06.22 |
申请号 |
CN201510896224.X |
申请日期 |
2015.12.07 |
申请人 |
中国石油大学(华东) |
发明人 |
葛保胜;孙婷婷;江小勇;王明清;杨秋霞;黄方 |
分类号 |
C12N15/70(2006.01)I;C07K14/52(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;A61K38/19(2006.01)I;A61P29/00(2006.01)I;A61P19/02(2006.01)I;A61P11/02(2006.01)I;A61P37/08(2006.01)I;A61P33/00(2006.01)I;A61P11/06(2006.01)I;A61P31/18(2006.01)I;A61P27/02(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I;A61P7/04(2006.01)I;A61P37/00(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/70(2006.01)I |
代理机构 |
北京冠和权律师事务所 11399 |
代理人 |
李建华 |
主权项 |
一种高活性人趋化因子的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1:根据NCBI数据库中Eotaxin‑1的氨基酸序列,对其密码子进行了优化,人工合成目的基因;步骤2:通过设计引物在其N端引入一个或多个His标签、TEV酶切位点,并在N端和C端分别引入限制性酶切位点EcoR I和Hind III;步骤3:利用PCR技术将目的片段进行扩增,再将基因片段双酶切后连接到用相同酶切割后的载体上面,而后导入大肠杆菌中进行异源表达,生产Eotaxin‑1蛋白。 |
地址 |
266580 山东省青岛市经济技术开发区长江西路66号 |