发明名称 一种高活性人趋化因子的制备方法及用途
摘要 本发明公开了一种高活性人趋化因子的制备方法及用途,包括如下步骤:步骤1:根据NCBI数据库中Eotaxin-1的氨基酸序列,对其密码子进行了优化,人工合成目的基因;步骤2:通过设计引物在其N端引入一个或多个His标签、TEV酶切位点,并在N端和C端分别引入限制性酶切位点EcoR I和Hind III;步骤3:利用PCR技术将目的片段进行扩增,再将基因片段双酶切后连接到用相同酶切割后的载体上面,而后导入大肠杆菌中进行异源表达,生产Eotaxin-1蛋白。本发明方法提供了一种简便、快速、低成本、高产量、高纯度的细胞趋化因子Eotaxin-1的制备方法,并对其活性进行了验证。
申请公布号 CN105695495A 申请公布日期 2016.06.22
申请号 CN201510896224.X 申请日期 2015.12.07
申请人 中国石油大学(华东) 发明人 葛保胜;孙婷婷;江小勇;王明清;杨秋霞;黄方
分类号 C12N15/70(2006.01)I;C07K14/52(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;A61K38/19(2006.01)I;A61P29/00(2006.01)I;A61P19/02(2006.01)I;A61P11/02(2006.01)I;A61P37/08(2006.01)I;A61P33/00(2006.01)I;A61P11/06(2006.01)I;A61P31/18(2006.01)I;A61P27/02(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I;A61P7/04(2006.01)I;A61P37/00(2006.01)I 主分类号 C12N15/70(2006.01)I
代理机构 北京冠和权律师事务所 11399 代理人 李建华
主权项 一种高活性人趋化因子的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1:根据NCBI数据库中Eotaxin‑1的氨基酸序列,对其密码子进行了优化,人工合成目的基因;步骤2:通过设计引物在其N端引入一个或多个His标签、TEV酶切位点,并在N端和C端分别引入限制性酶切位点EcoR I和Hind III;步骤3:利用PCR技术将目的片段进行扩增,再将基因片段双酶切后连接到用相同酶切割后的载体上面,而后导入大肠杆菌中进行异源表达,生产Eotaxin‑1蛋白。
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