微卫星不稳定性多重检测体系及试剂盒

摘要

本发明涉及一种微卫星不稳定性多重检测体系及试剂盒，本发明的检测体系包括通用—特异嵌合引物对和通用引物的混合物。通用—特异嵌合引物对分别针对单核苷酸微卫星位点BAT-26、BAT-25、NR22、NR24及NR21；通用引物是Flu-UP，通用—特异嵌合引物对中的各个上游引物5’端设有Flu-UP的序列；所述通用引物Flu-UP为荧光标记引物。本发明的微卫星不稳定性多重检测体系及其检测试剂盒克服了不同引物需多种荧光标记的不足，在同一个PCR反应体系中检测5个微卫星基因位点，结果直观可靠，省时高效，节省成本，可有效的对MSI基因位点进行检测分析。

主权项

一种微卫星不稳定性多重检测体系，包括通用—特异嵌合引物对和通用引物的混合物，其特征在于：所述通用—特异嵌合引物对分别针对微卫星位点BAT‑26、BAT‑25、NR22、NR24和NR21；所述通用—特异嵌合引物对中，针对所述BAT‑26的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，针对所述BAT‑26的下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；针对所述BAT‑25的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，针对所述BAT‑25的下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；针对所述NR22的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，针对所述NR22的下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；针对所述NR24的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，针对所述NR24的下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；针对所述NR21的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，针对所述NR21的下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；所述通用引物是Flu‑UP，所述通用引物Flu‑UP的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述Flu‑UP为5’端荧光标记引物；所述Flu‑UP的终浓度是0.8μM～1.2μM；针对所述BAT‑26、BAT‑25、NR22、NR24和NR21的下游引物的终浓度与所述Flu‑UP的终浓度的比值为1∶3至1∶2；针对所述BAT‑26的上游引物的终浓度与所述Flu‑UP的终浓度的比值为1∶85至1∶65；针对所述BAT‑25的上游引物的终浓度与所述Flu‑UP的终浓度的比值为1∶140至1∶110；针对所述NR22的上游引物的终浓度与所述Flu‑UP的终浓度的比值为1∶220至1∶180；针对所述NR24的上游引物的终浓度与所述Flu‑UP的终浓度的比值为1∶30至1∶20；针对所述NR21的上游引物的终浓度与所述Flu‑UP的终浓度的比值为1∶6至1∶4。