一种培养基中菌体浓度的测定方法

摘要

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种复合培养基中测定菌体浓度的改进方法。该方法包括发酵液保温、酶解、TCA萃取、吸光度测定、计算等步骤。本发明改进点主要体现在：该方法通过对发酵液的适当酶解处理，较好避免了从培养基中提取菌体核酸时固体成分中如黄豆粉、花生粉等物料中所含核酸或类似物的干扰，可以较为准确和充分的提取发酵液中菌体的核酸，从而更为真实地反映发酵液中菌体量，从而为更好为发酵生产提供参考和指导，表现出较好地实用价值和推广应用意义。

主权项

一种培养基中菌体浓度的测定方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：（1）取待测发酵液，将发酵液在45℃~50℃下保温20~40min；然后加入纤维素酶和果胶酶，以对发酵液进行酶解；所述纤维素酶和果胶酶的总加入量为发酵液质量的2%~4%；以质量比计，纤维素酶︰果胶酶=1:1.5~2.0，其中纤维素酶酶活≥25万U/g，果胶酶酶活≥10万U/g；酶解温度控制在35℃~50℃，酶解时间≥1h，但不超过5h；（2）将步骤（1）中酶解完成后的发酵液离心，弃上清，保留沉淀物；（3）向步骤（2）的沉淀物中加入2℃~4℃的5% 体积分数的TCA 溶液，洗涤沉淀物，离心，弃上清；重复此步骤一次；TCA溶液与步骤（1）中所取待测发酵液的体积比例为1：1~1.5；（4）向步骤（3）的沉淀中加5% 体积分数的TCA溶液，搅拌，然后在100℃的水浴中抽提10~15min，再置于冰水中冷却，离心，取上清液，弃沉淀物；（5）将步骤（4）所得上清液用5% TCA溶液稀释，OD₂₆₀测定吸光度，根据以下公式计算核酸浓度：式中：OD_260nm为TCA萃取液在260nm处所测得的吸光值；N为TCA萃取液稀释的倍数。